去泛素化酶对STAT3泛素化修饰的调节及其对白血病细胞增殖和凋亡的调控

STAT3是重要的信号转导子和转录因子。它在白血病细胞中异常活化，是白血病转化和肿瘤特征维持的重要机制之一。STAT3失活以及抑制STAT3活化具有潜在治疗意义。STAT3泛素化修饰及蛋白酶体途径降解是其失活的重要途径，然而，去泛素化酶对STAT3泛素化修饰和降解的调节，及其对白血病细胞增殖和凋亡的调控，尚待阐明。.我们在前期研究中，应用双荧光蛋白报告系统证实了STAT3蛋白通过蛋白酶体途径降解，观察了STAT3在不同细胞中的分布。本课题拟进一步探索：1）去泛素化酶对STAT3泛素化修饰和降解的调节：shRNA干扰人类全基因组75个有活性的去泛素化酶(DUBs)基因，结合上述检测系统，筛选出调节活细胞内STAT3稳定性的DUBs，再用传统IP/WB方法验证并探讨DUBs对STAT3泛素化修饰的调节机制，观察DUBs对STAT3亚细胞定位的影响；2）DUBs对白血病细胞增殖和凋亡的调节。

STAT3在白血病细胞中异常活化，是白血病转化和肿瘤特征维持的重要机制之，因而促进STAT3失活或者抑制STAT3活化具有潜在治疗意义。STAT3泛素化修饰及蛋白酶体途径降解是其失活的重要途径，然而，去泛素化酶（DUBs）对STAT3泛素化修饰和降解的调节。我们本项目研究中，应用双荧光蛋白报告系统，通过shRNA干扰人类全基因组75个有活性的去泛素化酶(DUBs)，筛选出去泛素化酶USP7、 USP11 以及USP20调节活细胞内STAT3稳定性。再用传统IP/WB方法验证USP7和USP11间接调控了STAT3在细胞内的稳定性。过表达USP7 USP11抑制了阿糖胞苷诱导白血病细胞系K-562凋亡的敏感性。通过shRNA干扰USP11 USP7协同促进阿糖胞苷诱白血病细胞K-562的凋亡。DUBs抑制剂B-AP15或WP1130通过促进STAT3的泛素化诱导K562以及HL-60细胞凋亡。B-AP15和WP1130还可增加白血病细胞对阿糖胞苷及STAT3抑制剂C188-9的敏感性。结果表明，去泛素化酶抑制剂B-AP15或WP1130对STAT3组成型活化的AML细胞具有潜在的治疗价值。