融合表达IL-10与变应原的口服腺病毒疫苗防治过敏的实验研究

Allergic diseases impact the life of affected people a lot. The use of traditional specific immunotherapy like subcutaneous injection or sublingual administration is limited by its long course of treatment and slow effect. In addition, allergies caused by non-aeroborne allergen like food and latex allergy could not be treated by those two methods.Animals contact an antigen through gastrointestinal tract first would not react to the same antigen when contact it by another way. This phenomenon is called oral tolerance. Immunoregulatory cytokine IL-10 play an essential role at the early stage of oral tolerance establishment. We plan to construct an oral allergen vaccine, which is mediated by reproduction-deficient adenovirus vector which express IL-10 and target allergen as a fusion protein.We give the vaccine orally before and after the mice are sensitized by allergen (OVA),and then detect the airway responsiveness , serum IgE and cytokines, reaction of lymphocytes from bronchus/long,spleen and mesentery to the specific allergen or irrelevant allergen ,so as to explore the preventive and therapeutic effects of the vaccine on allergy. Because adenovirus vectors could express the target gene in the intestinal mucosa continuously for some time,this vaccine might become a prospective new immunotherapy for allergy with convenience and economical efficiency.

过敏性疾病严重影响人们的工作、学习和生活。传统的特异性免疫治疗方法如变应原皮下注射或舌下含服疗程长，起效慢，且不能用于食物过敏、橡胶过敏等非气传变应原所致的过敏。 研究发现，在胃肠道预先接触抗原后，再用同样的抗原通过肠外途径免疫动物不会引起明显的全身反应，此即口服耐受，免疫调节因子IL-10在口服耐受建立的早期发挥关键作用。本研究拟将IL-10与变应原基因融合表达，利用肠道粘膜系统易产生免疫耐受、腺病毒载体高效安全等特点，构建以复制缺陷型腺病毒为载体的口服变应原疫苗，分别在哮喘模型小鼠致敏前后给药，通过检测小鼠气道反应性，血清变应原特异性IgE、IL-4等细胞因子的水平，以及支气管肺、脾脏、肠系膜、肠道淋巴细胞对变应原刺激的反应，比较实验组和对照组的差异，以探讨该口服疫苗在预防和治疗过敏中的作用。由于腺病毒载体能够在肠道粘膜持续表达目的基因，将是一种经济、简便而高效的免疫治疗新方法。

过敏性疾病严重影响人们的工作、学习和生活。传统的特异性免疫治疗方法如变应原皮下注射或舌下含服疗程长，起效慢，且不能用于食物过敏、橡胶过敏等非气传变应原所致的过敏。 研究发现，在胃肠道预先接触抗原后，再用同样的抗原通过肠外途径免疫动物不会引起明显的全身反应，此即口服耐受，免疫调节因子IL-10在口服耐受建立的早期发挥关键作用。本研究拟将IL-10与变应原基因融合表达，利用肠道粘膜系统易产生免疫耐受、腺病毒载体高效安全等特点，构建以复制缺陷型腺病毒为载体的口服变应原疫苗，分别在食物过敏模型小鼠致敏前后给药，通过观察过敏原激发后小鼠的活动性和大便情况，末次激发后血清变应原特异性IgE、IL-4等细胞因子的水平，以及肠系膜、肠道淋巴细胞对变应原刺激的反应等，比较实验组和对照组的差异，以探讨该口服疫苗在预防和治疗过敏中的作用。本研究按计划完成融合表达IL-10和过敏原（OVA）的重组腺病毒的构建，同时构建单独表达IL-10和OVA的重组腺病毒与空载病毒同做对照，通过ELISA检测到融合表达重组腺病毒目的基因有效表达，在重组腺病毒对食物过敏小鼠模型的预防及治疗作用的实验中，融合表达重组腺病毒载体疫苗与对照相比，对小鼠食物过敏的预防及治疗作用方面，未表现出显著性差异，未能确定融合表达腺病毒载体疫苗对食物过敏小鼠预期的预防和治疗效应，但在实验中发现现有的灌胃器、采血器等存在一定局限，经过反复摸索，对此进行了改进创新，并申请了国家专利。