脂筏结构在PSGL-1介导的β2-整合素活化和白细胞稳定黏附中的作用和机制研究

The recruitment of leukocyte at inflammation sites is mediated by a series of adhesion molecules. Among them, P-selectin glycoprotein legand-1 (PSGL-1) , expressed on the surface of leukocyte, play a critical role for the cell initial adhesion, and the followed stable adhesion is dependent of Integrins. Lipid raft is a dynamic minor structure on cell surface, which is full of cholesterol. Lipid raft has been reported taking part in cell adhesion, cell migration and cell activation. It is still not clear until now that whether the lipid raft structure functions during the dynamic change of leukocyte from initial adhesion to stable adhesion. Based on the previous published data and some of our experiment results, we inferred that the lipid raft, as a platform of anchoring proteins on the surface of leukocyte, participated in the PSGL-1 mediated β2-integrin activation and leukocyte adhesion. In this study, we will ① determ the role of lipid raft in PSGL-1 mediatedβ2-integrin activation and leukocyte stable adhesion, ② screen and identify the proteins which can regulating the function of PSGL-1 in the lipid raft structure, ③ closely examin the molecular mechanism of the proteins in regulating the PSGL-1 mediatedβ2-integrin activation and leukocyte stable adhesion.

炎症过程中白细胞在炎症部位的募集是由一系列黏附分子介导的，其中表达于白细胞表面的P-选择素配体(PSGL-1)主要介导了白细胞的起始黏附，而由此引发的稳定黏附则主要依赖于整合素(Integrin)的作用。脂筏(Lipid raft)是细胞膜上富含胆固醇和鞘磷脂的动态微区结构，参与了细胞黏附、迁移和活化等很多的生理事件。目前对于脂筏结构在白细胞由起始黏附至稳定黏附动态转变过程中的作用还不清楚。根据已有的文献资料和我们前期的一些实验结果，我们推测脂筏结构作为白细胞膜上一个蛋白质停泊的平台参与了PSGL-1介导的β2-整合素活化和白细胞稳定黏附。本研究将①确定脂筏结构在PSGL-1介导的β2-整合素活化和白细胞稳定黏附中的作用；②筛选和鉴定脂筏结构中能够调节PSGL-1功能的蛋白分子；③解析这些蛋白分子参与调节PSGL-1介导的β2-整合素活化和白细胞稳定黏附的分子机制。

炎症过程中白细胞在炎症部位的募集是由一系列黏附分子介导的，其中表达于白细胞表面的P-选择素配体(PSGL-1)主要介导了白细胞的起始黏附，而由此引发的稳定黏附则主要依赖于整合素(Integrin)的作用。脂筏(Lipid raft)是细胞膜上富含胆固醇和鞘磷脂的动态微区结构，参与了细胞黏附、迁移和活化等很多的生理事件。本项研究中，我们发现PSGL-1 被抗体交联可以提高β2 integrin 的活化程度及β2 integrin依赖的HL-60在ICAM-1上的黏附，扰乱脂筏结构能够明显影响PSGL-1活化β2 integrin和促进细胞黏附的能力，PSGL-1被抗体交联诱导了Syk和Vav1在脂筏结构中的募集。通过分离纯化脂筏组分和质谱分析，我们鉴定到一种脂筏相关蛋白β-adducin，功能分析发现β-adducin在调节PSGL-1介导的中性粒细胞滚动方面具有重要作用。降低β-adducin蛋白水平显著减弱中性粒细胞在P-selectin上的滚动。. 我们还在该项目的支持下探讨了PI3K激酶对由PSGL-1触发的信号与integrin 活化之间的相关性，结果发现PSGL-1的交联能够通过调节β1 integrin 分子的簇集和构型变化介导淋巴细胞在fibronectin上的黏附，PI3K激酶在PSGL-1交联引发的β1 integrin簇集和淋巴细胞黏附的事件中起到至关重要的作用，提示了淋巴细胞的起始黏附和稳定黏附之间的密切合作的重要性。我们还发现p85作为PI3K激酶的调节亚基能够与Rho-GDI2形成新的复合物。降低Rho-GDI2复合物的表达可以明显影响T淋巴细胞的黏附。我们确定Rho-GDI2分子上第130和153位酪氨酸特异磷酸化对于PSGL-1介导的淋巴细胞黏附于VCAM-1是非常重要的。. 本项研究现已发表相关的SCI检索论文5篇。