靶向miRNA与抑制血瘀型喉癌干细胞分化及增殖的关系研究

Laryngeal cancer（LC） is one of the common head and neck malignant tumors，constantly differentiated from laryngeal carcinoma stem cells（LCSC）.Successfully inhibiting differentiation and proliferation of LCSC can prevent the further development of LC .This project use CD133+ magnetic bead sorting LCSC from LC patients with blood stasis syndrome（BSS）. To use different doses of ligustrazine injection intervene these sorted cells as a vitro direct way, in order to understand the morphological, differentiation, proliferation and migration ability differences.After injecting different doses of ligustrazine into the random grouped nude mouse whose subcutaneous Back were vaccinated with LCSC of BSS for a period, to evaluate the difference of LCSC in nude mice in the differentiation, proliferation, migration and the capacity of forming tumors by weight and volume measurement, MTT test, flow cell detection, HE dyeing and CD105 immunohistochemical method. through comparing to the statistical miRNA rise or fall changes, to find out the best dose and corresponding targeted miRNA which can rouse the most obvious tumor-suppressing effect. This project is a bold attempt of combinating traditional Chinese medicine syndrome differentiation and treatment methods for LC with tumor stem cell technology and gene chip technology. It can increase the use of promoting blood circulation and remove blood stasis drugs in treating laryngeal carcinoma and further reveal the the potential contact between BSS and LC formation.

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，由喉癌干细胞不断分化而来，成功抑制喉癌干细胞的分化与增殖就能阻止喉癌的进一步发展。本项目利用CD133+磁珠分选血瘀型喉癌患者喉癌干细胞并鉴定，再用不同剂量川芎嗪注射液对其在体外直接干预处理，以了解其在形态、分化、增殖与迁移能力上的差异；将血瘀型喉癌的干细胞接种在随机分组的裸鼠体内，利用不同剂量的川芎嗪注射液处理裸鼠，取瘤后通过瘤体重量与体积测量、MTT检测、流式细胞检测、HE染色、CD105免疫组化等方法来评估喉癌干细胞在体内分化、增殖、迁移及成瘤能力上的差异，并与瘤体细胞中miRNA的上调或下调变化相比对，从中找出抑癌效果最好的剂量以及与其相对应的具有靶向意义的miRNA。本项目是将喉癌的中医辨证论治方法与肿瘤干细胞技术和基因芯片技术有机结合的大胆尝试，通过本研究可以拓宽活血化瘀药物在喉癌治疗中的使用范围，更深入的揭示血瘀证与喉癌形成之间的潜在联系。

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，由喉癌干细胞不断分化而来，成功抑制喉癌干细胞的分化与增殖就能阻止喉癌的进一步发展。本项目利用CD133+磁珠分选血瘀型喉癌患者喉癌干细胞，并通过一系列实验对其进行鉴定。..在细胞体外实验中，用不同剂量盐酸川芎嗪注射液对其在体外直接干预处理，发现川芎嗪对于激活细胞参与有丝分裂具有一定的积极意义，但是与顺铂相比，其抑制喉癌细胞增殖与分化的效率相对较低；另外，川芎嗪作为活血化瘀类的中药提取物，在促进喉癌细胞凋亡方面能力有限，不具有明显的促进细胞凋亡的功能。川芎嗪作用于CD133+喉癌细胞后促使细胞中的miRNA广泛上调表达，比单纯顺铂的刺激要显著的多，并由此找出了一些高通量表达的miRNA。..在细胞体内实验中，将血瘀型喉癌的CD133+细胞接种在随机分组的裸鼠体内，利用不同剂量的川芎嗪注射液处理裸鼠，发现各组瘤体的重量与体积并没有显著性的差异，CDl05在不同剂量组的喉癌瘤体中的表达量和其表征的血管密度值无显著性差异，由此表明不同剂量的川芎嗪注射液对血瘀型CD133+喉癌细胞在体内的分化、增殖及成瘤能力上并没有显著性的促进或抑制作用。川芎嗪作用于CD133+喉癌细胞后促使细胞中的miRNA发生变化，剂量越高上调表达的miRNA越多，也由此筛选出了一批高通量表达的miRNA。..通过上述实验，筛选出了一批具有靶向意义的miRNA，这为后续进一步针对这些靶向基因开展药物研究奠定了良好的基础，也为进一步揭示血瘀证与喉癌形成之间的潜在联系明晰了研究方向。