miRNAs在小鼠卵泡发育中的作用及其分子机制研究

卵泡发育是原始卵泡启动生长并经初级卵泡、次级卵泡、腔前卵泡、有腔卵泡而发育成成熟卵泡的过程。卵泡发生异常是导致不育不孕、自发流产等的主要原因。近年的研究表明microRNA(miRNA)以转录后调控方式参与雌性生殖过程的调节，且具有细胞和发育阶段的特异性，但众多的与卵泡发育相关的miRNAs及其作用的信号通路尚需阐明。本项目通过miRNA microarray筛选小鼠卵泡发育不同阶段的颗粒细胞中差异表达的miRNAs，通过体外和体内实验研究miRNA如何通过其靶基因发挥对卵泡发育过程中的颗粒细胞增殖和分化、卵母细胞成熟等的调控作用；同时，通过luciferase assay和染色质免疫共沉淀技术，寻找调控miRNA表达的相关转录因子，并在体内验证这种调控作用和功能，以阐明miRNA调控卵泡发育的信号通路。研究miRNA调控卵泡发育的分子机制，将为探讨女性不育的发病原因提供新的线索和切入点。

卵泡发育是原始卵泡启动生长并经初级卵泡、次级卵泡、腔前卵泡、有腔卵泡而发育成成熟卵泡的过程。卵泡发生异常是导致不育不孕、自发流产等的主要原因。近年的研究表明 microRNA(miRNA)以转录后调控方式参与雌性生殖过程的调节，且具有细胞和发育阶段的特异性，但众多的与卵泡发育相关的 miRNAs 及其作用的信号通路尚需阐明。本项目通过 miRNA microarray 筛选小鼠卵泡发育不同阶段的颗粒细胞中差异表达的 miRNAs，通过体外和体内实验研究 miRNA 如何通过其靶基因发挥对卵泡发育过程中的颗粒细胞增殖和分化、卵母细胞成熟等的调控作用；同时，通过 luciferase assay 和染色质免疫共沉淀技术，寻找调控 miRNA 表达的相关转录因子，并在体内验证这种调控作用和功能，以阐明 miRNA 调控卵泡发育的信号通路。通过对筛选出的差异表达显著的miRNA研究发现，miR-224通过靶向PTX3影响小鼠COCs扩展和排卵；且p53和p65协同参与TGF-β1对腔前颗粒细胞中miR-224转录调控。发现miR-383的产生受到SF-1的正调控，进而通过降低RBMS1和c-Myc蛋白水平来促进E2的生成；且miR-383可以和miR-320一道，在卵泡发育过程中通过调控E2F1和SF-1来影响颗粒细胞增殖和类固醇激素生成。此外，TrkA通过IL6影响EGF诱导的COCs扩展；且TrkA-ERK1/2信号通路被NGF激活后通过降调ESR2抑制CDKN1A的表达，促进mGCs的增殖。这说明miRNAs可以和转录因子相互作用，共同调节卵泡的发育。因此，研究 miRNA 调控卵泡发育的分子机制，将为探讨女性不育的发病原因提供新的线索和切入点。本项目发表6篇SCI收录的论文。