CA916798基因在顺铂诱导的肺癌多药耐药中的作用研究

CA916798基因是我们采用SSH方法从人肺腺癌多药耐药（MDR）细胞系SPC-A-1/CDDP中克隆的高表达基因，它可能在顺铂所致的多药耐药中起作用。本项目拟通过构建C-末端带有6×His标签的该基因的蛋白表达载体，经原核表达获得并纯化蛋白，免疫动物制备抗体；以酵母双杂交钓取与该基因相互作用的蛋白；将构建的该基因的蛋白表达载体，转染该基因表达量很低的小细胞肺癌细胞株，筛选出阳性细胞，建立可稳定高表达该基因的小细胞肺癌细胞株；另外，采用RNA干扰技术，构建能在细胞内表达小干扰RNA、特异沉默该基因的重组质粒，转染该基因高表达的A549/CDDP细胞，建立可稳定下调表达该基因的肺癌多药耐药细胞株；长时间培养，从正反两方面观察上述两种细胞的生物学行为及耐药、凋亡相关基因的变化，结合酵母双杂交结果，探讨该基因在MDR中的作用，为进一步明确其生物学功能进而寻找新的逆转耐药途径奠定基础。