基于Keap1-Nrf2-ARE信号通路的胡黄连苷Ⅱ保肝作用分子机制研究

肝损伤严重影响我国人民健康，是急需解决的重大医学问题。氧化应激是各种肝损伤的共同病理变化，而Keap1-Nrf2-ARE信号通路被认为是抗氧化应激的关键调节机制。我们在"十一五"国家科技重大专项"病毒性肝炎中医证候生物学技术平台研究"(2009ZX10005-020)和四川省重大科技项目(07SG004-001)资助下研究发现胡黄连苷Ⅱ具有抗氧化应激、保肝作用，故创新性地提出"胡黄连苷Ⅱ可能通过氧化应激关键信号通路-Keap1-Nrf2-ARE通路发挥保肝作用"假说。本课题采用L-O2肝细胞损伤模型，以Keap1-Nrf2-ARE通路相关信号为切入点，借助荧光定量PCR、Western Blot等分子生物学技术，从"量-效"、"时-效"多角度观察胡黄连苷Ⅱ干预后该通路中相关信号的蛋白及其mRNA表达情况，揭示胡黄连苷Ⅱ保肝作用的分子机制，阐明中药保肝作用的科学内涵。

本课题在前期研究基础上，结合氧化应激这一肝损伤共同病理变化，以氧化应激关键信号通路-Keap1-Nrf2-ARE通路为切入点，以过氧化氢诱导的人正常肝细胞株L02氧化损伤为实验模型，于氧化损伤造模前进行胡黄连苷Ⅱ药物预处理，借助实时荧光定量PCR、免疫印记（Western Blot）等分子生物学技术，分别检测上述处理后不同观察时间点（1h，24h，48h），药物不同浓度（0.5mmol/L，5 mmol/L）预干预对该氧化应激通路关键信号mRNA和蛋白表达变化的影响，探索胡黄连苷Ⅱ抗氧化保肝作用的分子机制。实验结果表明，胡黄连苷Ⅱ可上调该通路关键信号蛋白Nrf2 mRNA和蛋白水平表达，进而上调该通路下游抗氧化蛋白HO-1，GST，NQO1等表达增高，从而发挥抗氧化保肝作用，同时该上调作用随药物浓度增高、处理后至24h时间点观测时间的延长而增强，故存在一定程度“量-效”、“时-效”关系，该研究说明，Keap1-Nrf2-ARE氧化应激通路是胡黄连苷Ⅱ发挥抗氧化保肝作用靶点之一。本课题共资助发表相关期刊文章12篇，其中中文核心7篇，培养研究生共5名，其中博士生2名，硕士生3名。