基于反式互补的新型丙型肝炎病毒细胞感染模型的建立及其在丙肝研究中的应用

丙型肝炎是中国和世界上最主要的人类传染病之一。长期以来丙肝病毒（HCV）的研究受限于缺乏细胞感染模型，2005年我们在世界上首次成功地建立了HCV的体外细胞感染模型（HCVcc），为研究HCV的整个生命周期提供了重要的手段。最近我们利用反式互补HCV包膜蛋白的原理，建立了一个能产生只具有一次性感染力的HCV细胞培养模型(HCVΔE)，弥补了现有研究系统的不足。本课题将在前期工作的基础上，利用HCVΔE细胞培养模型开展如下研究：1、利用HCVΔE包膜蛋白是反式提供的特点来系统地研究HCV的包膜蛋白E1和E2在HCV侵入细胞和病毒包装释放过程中的作用。2、建立适用于多种HCV基因型的包膜蛋白的HCVΔE细胞感染模型；3、研究HCVΔE诱导中和性抗体的能力，初步探讨HCVΔE作为候选疫苗的可行性。这些重要科学问题的研究有助于进一步认识HCV感染的分子机制，对于HCV的治疗和预防有重要意义。

丙型肝炎是中国和世界上最主要的人类传染病之一，长期以来丙肝病毒（HCV）的研究受限于细胞感染模型的缺乏，2005年我们在世界上首次成功地建立了HCV的体外细胞感染模型（HCVcc），为研究HCV的整个生命周期提供了重要的手段。最近我们利用反式互补HCV包膜蛋白的原理，建立了一个能产生只具有一次性感染力的HCV细胞培养模型（HCVΔE）。本课题在这些前期工作基础上，围绕HCV包膜蛋白的反式互补和新型细胞感染模型的建立等问题开展研究，取得了如下结果: 1、成功构建包膜蛋白E1反式互补的HCVcc细胞模型（HCVΔE1），通过引入适应性突变，将HCVΔE1的滴度提高到10e5 ffu/ml。2、利用HCVΔE和HCVΔE1模型研究了HCV的包膜蛋白E1和E2在HCV侵入细胞和病毒包装释放过程中的作用，发现E1蛋白中的疑似融合肽序列在病毒侵入和组装过程中均发挥了重要作用，并找到了融合肽序列中关键氨基酸位点。3、成功构建了首例中国HCV毒株的细胞感染性cDNA克隆，建立了来源于中国临床病毒株的HCVcc细胞感染模型。4、研究了HCVΔE病毒颗粒作为HCV疫苗抗原的免疫原性，发现了重组蛋白sE2是一个潜在的HCV候选疫苗免疫原。我们的这些研究结果为HCV研究提供了新的研究工具，丰富了HCV感染的分子机制的认识，有助于HCV的防控策略的制定。