miRNA调控网络介导自然流产发生机制及补肾安胎法的干预研究

Spontaneous abortion (SA) is a common breeding barrier. Deficiency of progesterone receptor (PR) causes trophoblast apoptosis and plays a pivotal role in the pathogenesis of SA. Our research team previously confirmed that Jian-Wei-Shou-Tai-Wan (JWSTW) increased PR expression, inhibited trophoblast apoptosis, ameliorated luteal function and maintained pregnancy. Our preliminary study also found that miR-126-3p also significantly increased in villi of patients with SA, suggesting that miR-126-3p is implicated in the pathogenesis of SA. Using Bio-info software, we predicted that PR is the downstream target gene of miR-126-3p. Our present hypothesis is that JWSTW decreases miR-126-3p and increases PR expression, ameliorating trophoblast function and preventing against SA. Thus, the present project aims to elucidate the molecular mechanism by which miR-126-3p regulates PR expression and uncovers the molecular mechanism by which JWSTW prevents against SA, using the methods of gene clip, bioinformation, molecular biology as well as in vivo and in vitro models. Our project would provide novel targets of drugs treated with SA and new insights on the therapy of reno-protection and Fetus stabilization.

自然流产（SA）是常见的孕育障碍，孕激素受体(PR)调控滋养细胞凋亡是SA重要的发病机制，课题组前期研究证实减味寿胎丸能提高流产孕鼠PR表达，抑制滋养细胞凋亡，增强黄体功能而维持妊娠；同时发现SA患者绒毛组织miR-126-3p表达显著上调，提示miR-126-3p在SA发病中的重要作用。通过生物信息软件预测与文献研究均提示PR为miR-126-3p调控靶基因，故提出假说：减味寿胎丸可能通过下调miRNA-126-3p从而上调PR表达，改善滋养细胞功能达到补肾安胎的作用。基于此，针对发生SA的重要病理环节，整合基因芯片、生物信息学、分子生物学方法，利用细胞和动物模型，希冀从整体-细胞-蛋白-基因水平阐明miRNA-126-3p调控PR表达作用机制，进而阐释减味寿胎丸治疗SA的具体分子机理，不仅为治疗SA提供新的药物靶点，亦丰富了"补肾安胎"的科学内涵。

自然流产（SA）是常见的生殖障碍，滋养细胞功能的改变是其发生的关键环节。①经伦理委员会答辩获得伦理批文，签署知情同意书，通过基因芯片测序得到蜕膜组织筛选上调93个miRNAs，下调34个miRNAs，经生信分析筛选上调miR-126-3p可通过介导FOXO3下调PR，miR-126-3p调控靶基因PLXNB2影响SA的发生。通过临床组织样本PCR、WB、HE、IHC验证miR-126-3p、FOXO3、PR、PLXNB2、Bcl-2、Bax的表达。②细胞层面，转染构建细胞模型和RU-486诱导滋养细胞损伤模型，荧光素酶检测首次明确miRNA-126-3p能下调PLXNB2的表达，并通过影响滋养细胞的侵袭和迁移功能增加SA发生；购置药材并行基原鉴定，提取补肾安胎复方减味寿胎丸（JWSTW）和有效组分菟丝子总黄酮，并进行HPLC质量控制，干预后PLXNB2表达上升，同时挽救滋养细胞的迁移和侵袭功能，从而达到治疗作用；首次通过CHIP、EMSA、荧光素酶阐明了miRNA-126-3p介导FOXO3调控PR表达机制，阐释了减味寿胎丸在SA滋养细胞中可能通过抑制miRNA-126-3p介导上调FOXO3上调PR表达的保护机制；阐明了补肾安胎有效组分川续断皂苷VI 可促进凋亡模型状态滋养细胞增殖，降低其凋亡率，通过激活AKT信号通路上调Bcl-2表达、下调Bax表达，并能增加PR表达，从而达到抑制凋亡。③动物模型层面，构建了CBA/J× DBA/2 小鼠流产模型和流产大鼠模型，从复方-有效组分-有效成分层次，通过计算流产率，胚胎直径和体视镜观察胚胎，免疫组化、Western blot、PCR分别从宏观脏器-组织-基因-蛋白系统阐述了味寿胎丸、菟丝子总黄酮、川续断皂苷VI可提高模型流产率，提高激素水平及相应受体表达，可能通过提高miRNA-126-3p靶基因FOXO3、PLXNB2 PR的表达影响到SA发生而维持妊娠。本研究为SA深入机制研究提供稳定的载体，临床验证为早期临床鉴别诊断提供潜在标志物。验证补肾安胎法可通过降低miR-126-3p表达介导FOXO3上调PR的表达通过抑制滋养细胞的凋亡，通过降低miR-126-3p表达上调靶基因PLXNB2的表达促进滋养细胞的侵袭和迁移功能，从而降低SA发生的科学假说，丰富了自然流产的发生机制，为阐释补肾安胎法内涵。