南五味子抑菌物质及其抑菌作用机理研究

以南五味子为材料，在前期研究基础上，以金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌为主要目标菌，应用中心组合设计及响应面分析优化抑菌物质提取工艺。以抑菌作用为指示，通过分组分离、低温浓缩和重结晶纯化及制备色谱分离抑菌物质。经官能团检定、衍生物制备和HPLC-MS、NMR、IR及UV光谱分析，明确抑菌物质组成和结构。用扫描和透射电镜、FDA-PI双色荧光和PCR仪及酶学方法研究南五味子抑菌物质对目标菌细胞的损伤和呼吸作用、PPO、CAT、POD、SOD、乙酰乳酸合成酶、二氢吡啶二羧酸合成酶等的抑制作用。建立病原菌生长抑制动力学模型，以期阐明南五味子抑菌物质的抑菌生理学机制和细胞学途径。

1、提取物抑菌活性研究：以南五味子种子为材料,水和乙醇提取物对金黄色葡萄球菌等8种致病菌均具有良好的抑菌作用，乙醇提取物的抑菌活性最强，对G+菌的抑制活性强于G-菌。乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、宋内氏志贺氏菌等4种G+菌有较好的抑制作用。石油醚提取物对8种致病菌均无抑制作用。.2、提取物活性稳定性研究：121℃、30min 热处理和紫外光、超声波处理对乙醇和丙酮提取物抑菌活性无影响。这在食品工业中具有重要的应用价值。pH对提取物抑菌活性有明显的影响。pH≤4 时，丙酮提取物对全部供试菌有较好的抑菌作用。pH≥6 时，对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌无抑制作用。当pH≥5时，对铜绿假单胞菌无抑制作用。.3、食品添加剂对提取物抑菌活性的影响： VC、Na2SO3、NaCl 和葡萄糖对其抑菌活性具有一定的增效作用；Na+、K+、Ca2+、Mg2+和Fe3+有少许增效作用，Fe2+具有一定的抑制作用。.4、提取物对鸡蛋腐败菌的抑制作用及其在鸡蛋常温保鲜中的应用： Box-Behnken 试验设计，建立了抑菌圈响应面模型F(A,B,C)=24.91-0.19A+0.75B+1.02C+2.37AB+0.065AC+1.42BC+0.91A2+0.72B2-0.46C2。该模型的实测值与预测值具有较好的拟合度，可用于南五味子提取物对鸡蛋腐败菌抑制作用的分析及预测。鸡蛋在30℃，贮藏5 周，涂膜处理与对照的好蛋率分别为100%和11.23%，失重率分别为5.35%和16.08%。.5、南五味子提取物的抗氧化性研究：南五味子的乙醇、乙酸乙酯、丙酮和氯仿提取物对DPPH•、•OH 、ABTS•具有较强的清除能力。乙醇提取物对菜籽油具有较强的抗氧化作用，与BHT抗氧化能力相当；有机酸对乙醇提取物抗氧化活性有增效作用，其中柠檬酸的增效作用最强。.超声波优化提取条件是：频率75kHz，温度75℃，提取时间50min。无水乙醇提取物对DPPH•的清除率达94.24%，氯仿提取物对•OH 的清除率达80.96%。.6、通过对提取物重结晶纯化及制备色谱分离，HPLC-MS、NMR分析明确了抑菌物质主要为黄酮类化合物研究南五味子抑菌物质对细菌细胞的损伤和呼吸作用、PPO、CAT、POD、SOD等酶活性的抑制作用。建立了病原菌生长抑制动力学模型。