维药异叶青兰总黄酮对心肌肥厚大鼠的影响及机制研究

Plants of the genera Dracocephalum have the oxidation resistance, cardiac muscle protection, coronary disease treatment and hypotensive activity. Dracocephalum heterophyllum Benth. often applies treats hypertension, has the extremely high development prospect on medicinal resource. According to our previous study on Dracocephalum heterophyllum Benth,Dracocephalum heterophyllum Benth flavonoid are effective on inhibit myocardial hypertrophy of hypertensive rats, and possible mechanism related to RAS and calcium channel.Therefore, this research plans take the estate Dracocephallum heterophyllm Benth. as raw material, union pharmacodynamics screening,to optimize the extraction technology of total flavonoids and explore its possible mechanism of inhibiting myocardial hypertrophy from the myocardial cell culture, patch clamping technique, the whole animal experiment study.

青兰属植物具有抗氧化、心肌保护、冠心病治疗和降血压作用。异叶青兰在维吾尔医传统用药、藏医药及印度医药中常应用治疗高血压，具有极高的药用资源开发价值。本课题组前期发现异叶青兰总黄酮有明显的抑制高血压大鼠心肌肥厚的作用，并且其可能的机制与钙通道和RAS系统有关。据此，我们设计此项目，拟以地产异叶青兰为原料，结合药效学筛选，优化异叶青兰总黄酮的提取工艺，利用心肌细胞培养、膜片钳、整体动物实验等多种方法研究，从钙通道和RAS系统两方面探讨其抑制心肌肥厚的可能的机制。为开发利用该药材提供理论依据。

本课题优化异叶青兰总黄酮（DHBF）的提取纯化工艺，多方法、多角度观察并探讨其抑制心肌肥厚的作用及机制，主要研究成果如下：1）最佳提取纯化流程为1g:40ml的物料比，70%的乙醇，回流温度50℃，回流2h，提取2次。AB-8大孔吸附树脂，上样生药0.35g/ml，上样体积流量为1.5BV/h，洗脱溶剂为70%乙醇，洗脱体积为6BV，洗脱体积流量为1.5 BV/h。2）给予DHBF 10-50mg﹒L-1能不同程度的对抗 Ang II或NE 引起的心肌细胞生存率下降，表面积增大，降低c-Jun、ANP、BNP 和β-MHC的mRNA 相对表达，对抗心肌细胞内[Ca2+]i浓度升高，Ca2+-ATP酶的活性下降、CaMKII、HDAC、CaN和NFAT-3的相对蛋白表达的升高及NO 浓度和NOS活性下降。3）DHBF对KCl或NE 预收缩血管环具有浓度依赖性舒张作用；用L-NAME或MB预处理，舒张作用被明显抑制；无钙K-H液中，DHBF可明显抑制NE引起的细胞内钙离子的释放，并呈浓度依赖性的使氯化钙量效曲线明显下移。4）动物实验发现DHBF降低 SBP、LVSP、LVEDP、＋dp/dtmax，延长DD；能减小IVSd、LVPWd、升高FS、EF；可以减小心肌细胞横截面积，炎症细胞浸润，抑制心肌内血管中膜增厚，抑制心肌间质纤维化的发生；虽对AngⅡ影响没有显著性，但可以直接下调AT1的表达，降低ALD；升高NO水平；降低ET、TNF-α、IL-1β；调节MMP-9/TIMP-1的平衡。其可能作用机制通过抑制心肌细胞钙离子介导的CaN-NFAT-3和CaMK II-HDAC信号转导通路有关，抑制血管平滑肌抑制血管平滑肌上的电压依赖性和受体依赖性Ca2+通道活性（NO-cGMP信号通路），阻断L型Ca2+通道、抑制细胞内Ca2+释放和细胞外Ca2+内流以及激活和开放其他与Ca2+有关的离子通道，同时减轻炎症反应，改善内皮功能，改善冠脉微循环，抑制心肌外基质重构的发生，充分显示了其多靶点活性，以上研究为进一步开发新疆道地药材的推广使用提供了理论支持，也为高血压心脏病的治疗提供了新的候选药材。本项目发表标注该基金资助的文章共9篇，其中SCI收录4篇，1篇会议论文获新疆优秀会议论文三等奖，培养博士研究生1名，硕士研究生1名（在读），为今后的研究工作提供了更好的平台和基础。