GPR30介导雌激素对囊胚的快速激活效应及其在囊胚着床中的作用研究

我们前期工作已证明雌激素能够通过磷脂酶C引起囊胚细胞内游离钙离子的快速增加，根据最新文献报道，G蛋白耦联受体30（GPR30）可作为膜受体介导雌激素对靶细胞的快速效应。为进一步探索雌激素对囊胚快速激活效应的分子机制及其在囊胚着床中的作用，拟用小鼠囊胚为主要研究对象，以钙离子作为进一步研究的节点，采用细胞生物学、免疫生化、分子生物学和激光共聚焦显微镜等技术，首先确定囊胚细胞中GPR30的表达及其定位与雌激素的结合位点的一致性；在此基础上研究GPR30是否通过对PLC的激活介导雌激素所致囊胚细胞中游离钙增加；GPR30介导雌激素所致囊胚细胞中游离钙增加是否通过对整合素αvβ3及整合素α4β1配体FN的影响进而引发囊胚黏附及后续的着床行为。该研究将为揭示着床的分子生物学机制，解释一些不明原因的不孕，提高助孕技术的成功率，设计新的避孕措施提供新的思路。

我们前期工作已证明雌激素能够通过磷脂酶C引起囊胚细胞内游离钙离子的快速增加，根据最新文献报道，G蛋白耦联受体30（GPR30）可作为膜受体介导雌激素对靶细胞的快速效应。为进一步探索雌激素对囊胚快速激活效应的分子机制及其在囊胚着床中的作用，本项目以小鼠囊胚为主要研究对象，以GPR30、钙离子作为进一步研究的节点，采用细胞生物学、免疫生化、分子生物学和激光共聚焦显微镜等技术，研究GPR30是否介导雌激素对PLC的激活，进而诱导囊胚细胞中游离钙离子增加这一快速效应，并由胞内钙离子再引起囊胚细胞骨架蛋白的变化，进一步导致整合素的再定位及整合素与其配体亲和力的改变，最终影响囊胚的粘附及着床行为。结果显示GPR30在小鼠早期胚胎中均有表达，其在囊胚细胞中的表达与雌激素在囊胚细胞膜的结合位点一致；GPR30介导了雌激素快速诱导小鼠囊胚细胞内钙离子升高的效应，该效应与囊胚细胞内PLC的激活有关；GPR30介导的囊胚细胞中游离钙离子的增加影响了骨架蛋白talin、vinculin、actin及整合素αv、β1、β3在小鼠囊胚细胞的定位，并导致了小鼠囊胚与整合素配体FN亲和性的改变； GPR30介导的雌激素快速效应影响了小鼠囊胚与上皮细胞的黏附及后续的着床过程。本研究结果不仅揭示了雌激素对囊胚的快速激活效应及其机制，也提示实施IVF-ET时，对移植前的囊胚在体外给予雌激素处理提高胚胎的着床潜能的可能性，这为提高临床IVF-ET的移植成功率提供了一种可供参考的治疗策略。.本课题由四名硕士研究生和两名博士研究生共同参与完成，已在国内核心期刊发表论文两篇，另有三篇英文论文待发表，参编教材一部，并多次参加国内外学术交流活动。