杜仲的雄激素样作用及作用机制研究

雄激素分泌紊乱或受体代谢失常可能诱发多种疾病，如中老年男性雄激素部分缺乏综合症(PADAM)、前列腺增生、前列腺癌等。这些疾病临床发病率较高，显著影响老年人身心健康和生活质量。现用治疗药物中有相当一部分是雄激素受体(AR)配基，包括激动剂(agonist)和拮抗剂(antagonist)，通过调节受体功能发挥疗效，也被称为受体调节剂。因此，寻找疗效优异、选择性高的新型AR 受体调节剂一直是研究开发治疗AR相关疾病药物的热门方向。杜仲为补肾壮阳传统中药，主要化学成分结构符合植物雌/雄激素特点，且已有相关的雌/雄激素样作用的文献报道。本研究选择杜仲为模型，对其化学成分、雄激素样作用药效物质基础及作用机理、构效关系、体内药物代谢等进行研究，以期通过该项研究寻找中医传统理论（补肾）与现代医学理论（补充性激素）的结合点，为其他补肾壮阳中药的研究提供一种新的研究思路和方法。

杜仲为传统补肾温阳中药，本课题对杜仲的化学成分进行分离，提升杜仲质量标准，并从体内、体外实验两方面对杜仲的雄激素样作用进行研究。.（1）从盐杜仲中共分离鉴定了31个化合物，其中木脂素类15个；简单苯丙素类3个；环烯醚萜类2个；其他类6个。上述化合物中杜仲素B为新化合物，松柏醛，对羟基肉桂醛，5-羟甲基糠醛，芥子醛，(+)–1–hydroxy-2,6–bis-epi-pinoresinol，fraxiresinol，balanophonin，lirioresinol-A，焦性粘液酸，原儿茶酸，mudanside，berchemolide等12个化合物为首次从杜仲属植物中分离得到。.（2）为加强杜仲的质量控制，以松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷、京尼平苷酸为指标成分，建立了杜仲的薄层鉴别方法；采用超高效液相色谱（UPLC）法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量；并建立了杜仲中15个成分的HPLC含量测定方法。.（3）体内实验采用Hershberger法的未成熟大鼠模型和去势大鼠模型，以雄激素依赖的靶器官重量及血清中性激素水平作为检测指标，探讨杜仲雄激素样作用。生杜仲+TP能显著拮抗TP所致去势大鼠与未成熟大鼠体重增重作用；与模型组比较，生杜仲0.78g/kg剂量对去势大鼠腹侧前列腺和尿道球腺重量有显著促进作用，且对其他器官作用趋势与TP作用趋势一致；模型组大鼠的肾重量显著低于假手术组， TP、生杜仲可以显著增加去势大鼠的肾重量；去势大鼠血清T含量显著低于假手术组，其他指标（DHT, LH,FSH）未见显著性差异；阳性对照药丙酸睾酮组与模型组比较，对各项指标均未见显著性影响；生杜仲给药组与模型组比较，显著增加LH,FSH的含量，生杜仲与TP共同给药组与TP组比较，显著促进T含量。根据OECD指导原则，推断生杜仲具有拟雄激素样作用。.（4）体外实验 采用雄激素受体阳性的LNCaP细胞系和雄激素受体阴性的DU145细胞系为筛选模型。MTT法研究发现生杜仲不同极性溶剂提取物、盐杜仲75%乙醇提取物及其分段萃取物显著促进LNCaP细胞活力，并在一定浓度范围内呈剂量依赖关系。运用RT-PCR检测发现盐杜仲75%乙醇提取物及其分段萃取物能显著上调LNCaP细胞AR, PSAmRNA表达。25个化合物的筛选结果表明，杜仲醇、松脂醇二葡萄糖苷具有拟雄激素样作用；香草酸、丁香素具抗雄激素样作用。