Ath5-/Otx2+ 修饰促OC-RSCs成感光细胞分化及机制研究

感光细胞不可逆损伤导致视觉功能永久丧失。视网膜干细胞（RSCs）替代治疗是解决感光细胞丢失的有效手段，促进RSCs向感光细胞分化是替代治疗的核心问题。基于不同发育阶段来源、不同分化倾向的RSCs具有不同的转录因子组合表达的特点，是否可以通过改变RSCs的转录因子组合，促进RSCs向感光细胞分化呢？本项目以大鼠E12.5胚胎视杯RSCs（OC-RSCs）为模型，以决定感光细胞分化的关键转录因子Ath5和Otx2为切入点，构建Ath5-/Otx2+修饰的OC-RSCs，观察其成感光细胞分化的特性，并通过比较Ath5-/Otx2+修饰前后OC-RSCs的感光细胞分化相关转录因子表达以及膜蛋白表达谱的变化，以"Ath5-/Otx2+修饰-转录因子表达-膜蛋白"为主线，探讨Ath5-/Otx2+修饰促OC-RSCs成感光细胞分化的途径和分子机制。为认识感光细胞的定向分化机制提供新线索。

本基金的研究过程中我们应用了免疫荧光化学分析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、流式细胞分析、激光共聚焦、Western blot等方法，研究结果验证了我们的假设，膜受体的表达与视杯视网膜干细胞(OC-RSCs)的分化差异有关，不同膜受体的表达可能改变视杯视网膜干细胞的分化倾向。研究发现大鼠ED12.5胚胎视杯细胞和OC-RSCs全表达IGF IRα，而在ED13.5和ED15.5视杯中IGF IRα的表达逐渐减少。此外，实验结果还发现：1、使用SDS-PAGE检测OC-RSCs中otx2的表达，添加IGF IRα抗体处理后OC-RSCs的otx2表达明显增加；2、流式细胞分析、Western-blot检测发现IGF IRα抗体处理后OC-RSCs向Thy1.1方向的分化明显减少，向rhodopsin方向的分化明显增加。研究证实OC-RSCs是RSC向视网膜神经细胞定向分化机制研究的理想的细胞模型，也为视网膜变性性疾病提供了新的治疗线索。