Netrin-1调控缺氧诱导的EMT肝癌细胞"自我种植"的实验研究

肝癌易发生早期转移，术后5年复发率超过50%，其机制迫切需要深入探讨。最近研究显示，肿瘤转移不是一个单向过程，侵入循环系统的肿瘤细胞不仅向远处转移，还可以通过自我种植重新回到原发灶。自我种植对肿瘤复发转移提出了全新的认识，但其机制不清楚。我们前期研究表明缺氧环境中Netrin-1促进肝癌细胞发生EMT，EMT肝癌细胞侵袭力显著增强，具有抗失巢凋亡能力；侵袭力越强越容易发生自我种植，这些提示EMT肝癌细胞在自我种植中可能发挥重要作用，但其具体机制亟待研究。本项目在此基础上，研究Netrin-1调控EMT肝癌细胞的自我种植，探讨Netrin-1在膜上脂筏中的信号传导及下游分子机制；运用裸鼠模型，活体成像技术检测抑制Netrin-1和破坏脂筏对EMT肝癌细胞自我种植的影响。深入研究在Netrin-1促进肝癌自我种植的分子机制，阐明自我种植在肝癌早期转移复发中的作用，以期获得潜在干预靶点。

肝癌易发生早期转移是其术后复发及预后差的主要原因。在肿瘤的转移过程中，癌细胞主要通过上皮间质转化（EMT）获得迁移、侵袭能力。最近研究显示，肿瘤转移不是一个单向的过程，侵入循环系统的肿瘤细胞不仅向远处转移，还可以通过自我种植重新回到原发灶。自我种植对肿瘤复发转移提出了全新的认识，但其机制不清楚。Netrin-1是层黏连蛋白相关的分泌蛋白，参与调控神经轴突生长和肿瘤细胞的侵袭转移。本项目旨在研究netrin-1及其下游信号对肝癌细胞EMT自我种植的调节作用。通过慢病毒筛选得到表达荧光素酶的肝癌细胞；建立荧光素酶阳性肝癌细胞物理缺氧模型，通过细胞形态、标志蛋白及功能改变鉴定EMT细胞；ELISA检测发现缺氧培养EMT肝癌细胞Netrin-1及其下游信号通路表达增强，siRNA干扰Netrin-1的表达及抑制脂筏可抑制EMT肝细胞侵袭力，转染Netrin-1质粒增强EMT肝癌细胞侵袭能力；通过小鼠肺转移、肝转移模型及活体成像技术，我们发现检测抑制Netrin-1和破坏脂筏可抑制EMT肝癌细胞自我种植。通过不同水平研究发现Netrin-1对肝癌细胞自我种植的重要调节作用，进一步深入研究Netrin-1调控肝癌细胞自我种植的分子机制，可能为抑制肝癌早期转移提供干预靶点