特异性双价抗体分子探针在糖尿病脑病诊断及疗效评价的实验研究

Molecular Imaging has taken an important step in the developing gross morphology imaging to microscopic morphology, biological metabolism, gene imaging. With the clinical significance of a large number of receptors has been elucidated, preparing a molecule probe that can identify a receptor molecule probe has become the major direction of field research. At present, the receptor imaging is the most noticeable. The latest research results of the project have revealed that the important role of insulin like growth factor 1 (IGF1) on the development of diabetic encephalopathy,APP17 peptide has obvious improving cognitive abilities on diabetic encephalopathy rats. IGF1R is the target receptors of APP17 peptide which is improve the PC12 cell metabolism of sugar. The project intends to use molecular biology and protein engineering technique to develop a bivalent antibody molecule probe through the blood-brain barrier, to diagnose diabetic encephalopathy in rats, to find the key in the technology of molecular probes to a certain extent，with dadopenletic acid dimeglumine salt coupling,useing MR to detect imaging effect. To evaluate evaluation of in diagnosis of diabetic encephalopathy and the role of APP17 peptide therapeutic effects by MR imaging，which would provide more specific technical reference for address this type of for the design, preparation and characterization.

分子影像学使影像学从大体形态学成像向微观形态学、生物代谢、基因成像等方面发展迈出了重要的一步。随着生物体内大量受体的临床意义被阐明，开发可特异性地识别某一受体的分子探针成为本领域主要研究方向。目前，最受关注的热点为受体显像，课题组前期最新研究成果证明胰岛素样生长因子受体（IGF1R）在糖尿病脑病的发生发展中的重要作用，APP17肽对糖尿病脑病大鼠的认知能力具有明显的改善作用，IGF1R为APP17肽改善PC12细胞糖代谢的靶受体。课题组拟采用分子生物学和蛋白质工程技术，研发一种可通过血脑屏障识别脑部受体双价抗体分子探针，与钆喷酸二葡甲胺偶联，采用MR检测成像效果，并应用MR评价其在糖尿病脑病诊断及APP17肽治疗效果方面的作用，为分子探针的设计、制备以及表征分析，提供更多、更具体的技术参考；为建立以IGF1R为靶点诊断糖尿病脑病及评价APP17肽疗效实现糖尿病脑病诊治一体化提供理论依据。

分子影像学使影像学从大体形态学成像向微观形态学、生物代谢、基因成像等方面发展迈出了重要的一步。随着生物体内大量受体的临床意义被阐明，开发可特异性地识别某一受体的分子探针已成为本领域的主要研究方向之一。.本项目应用药理学、影像学和分子生物学等技术，①利用抗体库技术筛选Anti-IGF1R抗体的重链基因序列，制备Anti-TFR/IGF1R双价抗体；评价抗体与抗原的亲和性 (TFR-转铁蛋白受体)。通过淋巴细胞分离试剂盒获取外周血淋巴细胞；RNA提取试剂盒提取淋巴细胞总RNA ,并使用反转录试剂盒对所得 RNA 进行反转录,获得 cDNA ,通过巢式 PCR 获取 VHH目的片段。②研究制备特异性通过血脑屏障分子探针技术；制备可通过血脑屏障的IGF1R显像的分子探针（Anti-TFR/IGF1R-Gd-DTPA）；探讨脑内特异性探针的应用价值；应用Knobs-into-holes技术制备Anti-TFR/IGF1R-Gd-DTPA分子探针，通过改良过的Chizzonite放射性碘化协议标注在碘I131的抗体上；计算Anti-TFR/IGF1R-Gd-DTPA分子探针通过血脑屏障的效率；通过免疫组化确定该探针在脑组织的分布。③Anti-TFR/IGF1R- Gd-DTPA分子探针在体内的显像效率和质量；应用MR显像，探索糖尿病脑病诊断和治疗效果评价的新思路；④应用免疫组化及MR显像，对比分析正常对照组、糖尿病脑病组、APP17肽治疗组，评价特异性分子探针Anti-TFR/IGF1R- Gd-DTPA对糖尿病脑病诊断和治疗效果评价的价值。.综合上述研究结果，在一定程度上初步解决这类分子探针的关键技术，为在分子探针的设计、制备以及表征分析，提供更多、更具体的技术参考；为建立以IGF1R为靶点诊断糖尿病脑病及评价APP17肽疗效的新思路提供理论依据。