华佗再造丸促进脑缺血后神经功能恢复的血管新生和神经再生机制

Huatuo Zaizao Wan (HT), a famous Traditional Chinese Medicine, is widely used to improve the functional recovery after stroke. The results from clinical and basic study showed that HT can ameliorate the injury induced by cerebral ischemia and promote the functional recovery in the patient subjected to stoke. Recent experiment from our laboratory also demonstrated that HT treatment had beneficial effects on the recovery of functional impairment after stroke, accompanied by angiogenesis and neurogenesis. The objective of the present study is to assess the time-effect and dose-effect relationship of HT to improve the functional recovery after cerebral ischemia. To evaluate the effects of HT on angiogenesis and neurogenesis, the density of cerebral blood vessels, VEGF、VEGFR、HIF-1、Ang-1、Tie-2、GAP-43 and SDF-1, etc. were assayed by the method of ELISA, RT-PCT, Western blot, immunofluorescence, immunohistochemistry, and confocal laser scanning microscope. In addtion, the effects of HT on cognition after stroke will be observed and the mechanism, including the effect of HT on the acetylcholinesterase (AChE) and choline acetyltransferase (ChAT), will also be explored. The present study aimed to elucidate the mechanisms and characteristic of HT on recovery of neurological function in cerebral ischemia. Therefore, it will provide a theoretical basis and example for Traditional Chinese Medicine (e.g. HT) being used to treat functional recovery after stroke.

华佗再造丸（HT）是用于痰瘀阻络之中风恢复期和后遗症的名优中药。临床和基础研究显示，HT对脑缺血损伤具有保护作用，对中风病人神经功能恢复具有促进作用，但尚未开展HT促进神经功能恢复机制的研究；我们前期动物实验研究显示，HT能改善运动神经功能，初步确定与促进缺血后血管新生和神经再生相关。本课题以动物脑缺血模型，研究HT对神经功能恢复影响的量效、时效（何时给药和维持多长时间）关系；以RT-PCR、Western Blot、免疫组化、激光共聚焦等研究HT对血管新生和神经再生及其相关的VEGF、Ang-1、Tie-2、GAP-43、SDF-1等信号分子的影响，以及对缺血后认知功能的影响及与胆碱能分子AChE、ChAT的关系，明确HT促进脑缺血损伤后神经功能恢复的作用特点及其血管新生和神经再生机制，为HT用于中风后神经功能恢复提供实验依据，为中药治疗中风（恢复期和后遗症）得到更广泛认可提供理论支持。

华佗再造丸（HT）具有活血化瘀、化痰通络、行气止痛之功能，本课题研究了HT促进脑缺血损伤后神经功能恢复的作用及机制，以及与丹参素或阿司匹林联用对减轻脑缺血损伤、改善血液流变学是否有协同作用。.主要研究内容：.1. 脑缺血大鼠给予HT，采用平衡木等实验评价神经功能恢复状况；免疫荧光法观察HT对神经再生的影响；RT-PCR检测HT对脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA表达的影响；Western blot检测HT对BDNF、基质细胞衍生因子-1（SDF-1）等蛋白表达的影响。2. 脑缺血大鼠给予HT，Zea-Longa评分等实验评价神经功能恢复状况，TTC染色观察脑缺血面积变化，免疫荧光法观察HT对血管新生的影响，RT-PCR检测HT对血管内皮生长因子（VEGF）等mRNA水平的影响，Western blot检测HT对VEGF等蛋白表达的影响。3. 脑缺血大鼠联合应用HT和丹参素，Zea-Longa评分观察联合用药对神经功能及脑缺血面积的影响；RT-PCR检测联合用药对缺血脑组织VEGF等 mRNA水平的影响。4. 新西兰白兔给予HT和阿司匹林。观察HT与阿司匹林联合用药对全血低切及高切黏度、血浆黏度、活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间和纤维蛋白原水平的影响。.结果：.1. HT可缩短脑缺血大鼠感受到胶布所需时间、缩短走平衡木时间、降低不对称值；HT促进脑缺血大鼠脑内BDNF mRNA 表达及神经元再生，上调缺血侧脑组织BDNF、SDF-1和CXCR4等蛋白表达。2. HT可改善脑缺血大鼠神经功能，缩小脑梗死面积，促进脑血管新生，增加脑组织内HIF-1α、VEGF mRNA表达，促进HIF-1α、VEGF蛋白表达。3. HT与丹参素联用可减小脑缺血面积，促进脑缺血大鼠神经功能恢复，增加VEGF mRNA表达。4. HT与阿司匹林联用能够明显降低兔全血低切黏度、全血高切黏度及血浆黏度，显著延长兔凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间。.本课题明确了HT促进脑缺血损伤后神经功能恢复的作用及其血管新生和神经再生机制，为HT用于中风后神经功能恢复提供实验依据，为中药治疗中风（恢复期和后遗症）得到更广泛认可提供理论支持。此外，本课题证明HT与活血化瘀类中药或阿司匹林联用防治缺血性脑血管疾病优于单一用药，这对于HT临床联合用药具有重要指导作用。