牙鲆CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞亚群的鉴定及其免疫特性研究

T lymphocyte subpopulations and their function are the key issues in the study of the immune response of fish. In this project, T lymphocyte marker molecules of CD3, CD4-2, CD8βin Japanese flounder have been cloned, CD4+, CD8+ T lymphocyte subpopulations cell related markers, enzymes, cell and protein markers of molecules and cytokines will be studied, preparation of specific antibody and nucleic acid probe will be performed; the recombinant protein expressed from eukaryotic system will be used as immunogen, cell fusion method is employed for monoclonal antibody productions of CD4-1, CD4-2, CD8αand CD8β; Using of rabbit polyclonal antibodies against CD3 and CD4-1, CD4-2, CD8α, CD8βmAb, CD4+ and CD8+ subpopulations are identified in peripheral blood cells; the effects of exogenous antigen, endogenous antigen, thymus independent antigen, T cell proliferation inhibitor or stimulator on immune response of CD4-1, CD4-2, CD8α, CD8β T cells are studied; Tissue distribution of CD4-1, CD4-2, CD8α, CD8β T cells will be found out at genetic and cellular level. The aims are to elucidate the classification and immunological characteristics of CD4 +, CD8 + T cell subpopulations in flounder, providing a new understanding of the immune function of T cells in fish, also providing a new strategy for the prevention and immune control of diseases.

T淋巴细胞亚群及其功能是研究鱼类获得性免疫应答的核心问题。本项目在已克隆获得牙鲆T淋巴细胞标志分子CD3、CD4-2、CD8β的基础上，拟深入研究CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群的标志分子，制备特异性抗体和核酸探针，以真核重组表达蛋白为免疫原，细胞融合法研制CD4-1、CD4-2、CD8α、CD8β分子的单抗；应用CD3兔多抗和CD4-1、CD4-2、CD8α、CD8β的单抗，鉴定外周血细胞中CD4+、CD8+ T细胞亚群；研究外源性抗原、内源性抗原、非胸腺依赖性抗原免疫后，T细胞增殖剂、T细胞抑制剂刺激后，牙鲆外周血白细胞中CD4-1、CD4-2、CD8α、CD8βT细胞的免疫应答特征；从基因和细胞水平研究CD4-1、CD4-2、CD8α、CD8βT细胞的组织分布。研究旨在阐明牙鲆CD4+、CD8+T细胞亚群的分类及其免疫特性，为鱼类T细胞的免疫功能提供新的认识。

鱼类作为低等脊椎动物，其T淋巴细胞及其亚群的鉴定、组织分布、功能及分化的相关研究，对于解析鱼类免疫相应机理、获得性免疫效应过程，以及评价疫苗免疫效果等具有重要科学意义。T淋巴细胞是获得性免疫应答的关键细胞，抗原刺激后T淋巴细胞亚群的效应机制决定了机体体液免疫和细胞免疫的防御效果。本项目在已有的研究基础上，筛选出牙鲆T淋巴细胞及其亚群的表面标志分子，成功研制出表面标志分子的特异性抗体，鉴定出牙鲆T淋巴细胞群及两类T淋巴细胞亚群；体内外实验研究发现牙鲆T淋巴细胞能够调节B淋巴细胞比例及抗体产生水平，显示T淋巴细胞是获得性免疫的核心细胞；研究了不同类型抗原刺激后，T淋巴细胞及各类型T淋巴细胞亚群的免疫应答规律亚群，解析了T淋巴细胞各亚群免疫应答的差异途径。研究成果先后在“第十四届发育与比较免疫学年会”“第三届世界鱼贝类免疫学会”等国际会议进行广泛交流。为揭示鱼类细胞免疫应答反应及获得性免疫应答机理奠定了理论基础，也为鱼类疫苗的效果评价提供了有力的技术支撑，具有较好应用前景。发表标注本项目号的SCI收录论文共计32篇，其中第一标注论文24 篇；受理国家发明专利2项；培养博士研究生3名，硕士研究生2名；获山东省优秀青年科技创新奖。顺利完成项目任务，达到预期目标。