转录因子Gli家族成员在乳腺癌从雌激素依赖性转为非依赖性中的作用和机制的研究

乳腺癌从雌激素依赖性转为非依赖性是导致患者内分泌治疗失败和死亡的主要原因，其发生机制至今尚未完全阐明。转录因子Gli（Gli1和Gli2）是Hedgehog信号转导通路最下游的效应分子。与雌激素受体(ER)一样，Gli介导的信号通路在乳腺发育及乳腺癌发生、发展中也具有重要作用。本课题拟在前期发现了Gli1表达增多可以明显促进乳腺癌细胞雌激素非依赖性的增殖，并抑制ER-α表达和转录活性的基础上，用临床乳腺癌样本进一步确定Hh/Gli通路中的重要分子与ER-α和孕激素受体（PR）的关系，探讨Gli1抑制ER-α表达和活性的机制，并进一步筛选和确定介导Gli促增殖作用的靶基因以及与其相互作用的其他信号转导通路。该研究不仅有助于阐明Hh/Gli通路在乳腺癌从雌激素依赖性向非依赖性转化中的作用和机制，还有可能为判断乳腺癌对内分泌治疗敏感性提供新的预测指标，并为治疗乳腺癌的新药设计提供靶点。

Hedgehog信号转导通路在乳腺发育及乳腺癌发生、发展中具有重要作用。Gli是Hedgehog信号转导通路的转录因子，也是该通路激活后的产物之一。但对其调节的靶基因和作用的认识还很有限。本课题拟在前期发现了Gli1表达增多可以明显促进乳腺癌细胞雌激素非依赖性的增殖，并抑制ER-α表达和转录活性的基础上，进一步研究转录因子Gli1在乳腺癌细胞生物学行为中的作用和可能的靶基因，并探讨了影响Gli1表达的一些因素，为乳腺癌临床治疗寻找新的靶点。研究发现稳转高表达Gli1能促进乳腺癌细胞的增殖、粘附，促进其在化疗药作用下细胞的存活，并抑制MCF-7细胞的迁移。采用基因芯片技术从稳转高表达Gli1的MCF-7与对照细胞中筛选出差异表达基因338个，这些基因涉及细胞增殖、凋亡、粘附、趋化、炎症反应、泛素化、代谢等各方面；用real time PCR 方法对其中部分差异表达基因进行了确定，并对部分基因进行了蛋白水平的检测，初步证明 BIRC3、CCL2可能为Gli1的直接靶基因，它们可能参与了Gli1抗凋亡等作用。而Gli1下调的ROCK蛋白可能与Gli1的迁移抑制有关。实验还证实雌激素E2能时间依赖性地上调Gli1 的表达，瞬时转染ERα能增加Gli1的转录活性，此外血清浓度的降低也能上调Gli1的表达，提示Gli1的表达能增强乳腺癌细胞在不利环境下的生存能力。我们还用临床乳腺癌样本进一步探讨了Gli1表达和细胞核浆定位与乳腺癌ER表达、PR表达和临床分级的关系，但是可能由于抗体的质量问题，发现乳腺癌标本中Gli1阳性率只有18.8%，其Gli1表达与ER和PR表达以及临床分级均无统计学相关性。上述研究有助于进一步阐明Gli1的作用、靶基因以及在乳腺癌细胞发生发展过程中的作用。