肝癌细胞自噬对树突状细胞交叉递呈肿瘤抗原HBx的影响与新型肿瘤细胞疫苗抗肝癌作用及机理研究

乙肝病毒X蛋白(HBx)上存在CTL抗原表位，同时90％的HBV相关性肝癌患者的肝癌组织中表达HBx。因此，当HBx特异的CTL被激活时，HBx可以成为肝癌免疫治疗的一个潜在靶点。申请人前期发现HBx重组腺病毒疫苗在体内可通过诱导CTL反应产生良好的抗肝癌效果；同时HBx还可增强肝癌细胞的自噬作用。近年研究发现自噬不仅参与细胞代谢，还参与抗原递呈。本课题拟在前期工作的基础上从HBx既能增强细胞的自噬又存在CTL抗原表位的特性出发，利用激光共聚焦显微术、CFSE标记示踪技术、流式细胞术、磁珠分选、RNAi技术等方法研究肝癌细胞自噬后能否增强DCs对肿瘤抗原HBx的交叉递呈和CD8+T细胞的交叉致敏及其机制；并设计一种自噬型HBx修饰的肝癌细胞疫苗，在体内观察其抗肝癌效果，并利用淋巴细胞亚群分析及基因敲除小鼠模型深入研究其抗肝癌的免疫学机制，为拓宽肿瘤细胞疫苗的增强策略提供新思路和理论基础。

乙肝病毒X 蛋白(HBx)上存在CTL 抗原表位，同时90％的HBV 相关性肝癌患者的肝癌组织中表达HBx。因此，当HBx 特异的CTL 被激活时，HBx 可以成为肝癌免疫治疗的一个理想靶点。我们按照课题计划书进行课题研究，取得了以下成果：（1）HBx能增强X-ray诱导的细胞自噬作用；（2）利用HBx既具有CTL抗原表位，又能够增强X-ray诱导的自噬作用，我们开发出新型自噬型靶向性肝癌治疗性疫苗，即HBx修饰的肝癌全细胞疫苗；（3）新型自噬型靶向性肝癌治疗性疫苗在小鼠体内能诱导CTL反应，靶向杀伤HBx+肝癌细胞，抑制肝癌的增殖，延长荷瘤小鼠的生存时间，具有良好的抗肝癌效应；（4）我们利用磁珠分选、流式细胞术、CFSE标记示踪等技术，发现肝癌细胞自噬后能增强诱导DCs成熟，增强DCs 对肿瘤抗原HBx 的交叉递呈和CD8+T 细胞的交叉致敏。同时我们利用RNAi和自噬抑制剂处理等手段进一步证实肝癌细胞自噬能增强诱导DCs成熟和对肿瘤抗原HBx 的交叉递呈和CD8+T 细胞的交叉致敏；（5）我们发现IL-12能明显促进HBx诱导的CTL 反应，我们构建了HBx双基因肝癌疫苗，其在小鼠体内发挥良好的抗肿瘤效应，机理研究表明疫苗通过招募免疫细胞(CD8+T细胞，巨噬细胞和树突状细胞)浸润到肿瘤组织，同时抑制肿瘤血管内皮细胞等肿瘤基质细胞的生长，有效地将对肿瘤有利的微环境转变成抗瘤的环境。课题的研究为肝癌的生物靶向治疗提供新思路。通过课题研究我们已发表2篇SCI论文，申请2项专利，其中1项以获得授权，培养硕士研究生4名，课题开发的肝癌疫苗产品已实现转让。