重症急性胰腺炎毛细血管渗漏机制及骨髓间充质干细胞的干预效果评价

重症急性胰腺炎（SAP）毛细血管渗漏的严重程度决定了患者的病情轻重，当多个器官出现严重的毛细血管渗漏就可能导致多器官功能的不全，甚至衰竭。SAP时毛细血管渗漏是普遍现象，但其机制尚不明了，临床上主要通过补充胶体（如：白蛋白），以提高渗透压改变渗漏情况，缺乏专门的干预措施。本项目通过内皮细胞培养、建立SAP模型，并采用激光共聚焦显微镜、电镜、荧光显微镜、流式细胞仪及分子生物学技术，在细胞、亚细胞及分子水平上研究炎性细胞因子作用下的内皮细胞凋亡，SAP时毛细血管内皮细胞骨架蛋白、水通道蛋白的空间构象改变，内皮细胞本身及其连接的改变，内皮细胞水通道蛋白、细胞骨架肌动蛋白、血管扩张刺激磷蛋白及金属质蛋白酶等各种蛋白的表达，以探讨SAP时导致毛细血管渗漏的机制；在此基础上，骨髓间充质干细胞进行治疗，并重点观察它对毛细血管内皮屏障及水通道蛋白的影响，为骨髓间充质干细胞治疗SAP提供临床及理论依据。

根据研究计划安排，圆满完成体外与体内研究。通过体外培养血管内皮细胞，炎性细胞因子刺激，流式细胞仪及透射电子显微观察，了解血管内皮细胞的凋亡情况及血管内皮细胞超微结构的变化。通过建立重症急性胰腺炎大鼠模型及使用骨髓间充质干细胞治疗，观察重要脏器毛细血管渗漏改变情况，测定与毛细血管渗漏密切相关的血管扩张刺激磷蛋白、水通道蛋白、基质金属蛋白酶等蛋白的改变，探索SAP毛细血管渗漏的可能机制及骨髓间充质干细胞治疗的效果及可能机制。. TNF-a、IL-1β刺激人脐静脉血管内皮细胞，VASP 、AQP-1蛋白及mRNA的表达相应的出现逐渐减弱，血管内皮细胞出血凋亡，并呈现时间和剂量依赖性。透射电子显微镜的观察，随着TNF-a、IL-1β浓度的提高或作用时间的延长，在细胞超微结构方面亦可见线粒体肿胀，内质网扩张、细胞肿胀，细胞膜破坏、细胞坏死等一系列细胞损伤的过程，可见TNF-a、IL-1β对血管内皮细胞呈渐进性直接损害直至细胞凋亡。. SAP时血清白蛋白降低，腹水量升高，腹水白蛋白含量上升，胸腹水淀粉酶升高，血清淀粉酶、Cr、BUN、TNF-α、IL-1β明显升高；BMSCs治疗后上述指标改善。SAP时胰腺、肾脏组织组织出现毛细血管内皮屏障的破坏，并随时间增加而破坏加重。BMSCs可抑制SAP大鼠胰腺、肾脏中AQP1、VASPmRNA及蛋白的下降，抑制SAP大鼠胰腺中MMP-9mRNA及蛋白的升高；BMSCs可减轻SAP大鼠胰腺、肾脏毛细血管内皮屏障的破坏，抑制血清炎症因子TNF-α、IL-1β的过度表达；BMSCs可减轻SAP大鼠胰腺、肾脏组织的损害。BMSCs治疗能够减轻脑水肿，抑制脑毛细血管渗漏现象产生，调节炎症反应，减轻炎症损伤，降低AQP-4表达水平，对脑组织起到保护，促进损伤修复。SAP组大鼠肝脏组织AQP-1基因与蛋白均显著上调，毛细血管渗漏增加。. SAP时大鼠肠道、肺的毛细血管发生了渗漏。cAMP／PKA信号转导通路参与了SAP毛细血管渗漏的过程。BMSCs治疗通过减少SAP大鼠炎性细胞因子的释放，以减少炎性细胞因子对内皮细胞直接攻击导致的凋亡与坏死；降低可导致毛细血管基底膜降解的MMP9及VASP释放，保持毛细血管基底膜的完整性，减小SAP时增宽的毛细血管内皮细胞间间隙，通过上述机制来保持毛细血管内皮屏障的完整性，阻止SAP大鼠毛细血管渗