基于调控TGF-β1及ECM途径研究益气化瘀化痰法对肝肺肾纤维化“异病同治”的作用及机理

Organ fibrosis is the common pathological basis of organ sclerosis and organ function failure by excessive deposition of extracellular matrix components in tissue and organs leaded various pathogenic factors. In this study, the different models including diabetic nephropathy induced by STZ, liver fibrosis induced by carbon tetrachloride combined with low protein and high fat diet, and Lung fibrosis induced by bleomycin are established. The TCM compound recipes based on replenishing qi, resolving blood stasis, resolving phlegm are applied; meanwhile the positive control group by western medicine and model group are established. To explore the mechanism and effect of treating different diseases with the same methods by replenishing qi, resolving blood stasis and resolving phlegm, the protein expressions and mRNA levels of TGF-β1, HMGB1, MCP-1, TLR, PPARγ, Ln, Fn, and Ⅳcollagen are detected. The content and activity of MMPs, TIMPs, and PAI-1 are tested. The pathological morphology and ultrastructures of the liver, lung and kidney tissues are observed as well. The study can help us explore the passageway of preventing and treating important organ fibrosis(liver, lung and kidney) and enhance the effect of the methods in guiding and treating organ fibrosis.

器官纤维化是各种致病因素所致的ECM成分在组织器官内过度沉积，是器官硬化和器官功能衰竭的共同病理基础。本研究建立STZ诱导的糖尿病肾病、四氯化碳+低蛋白高脂饮食诱导的肝纤维化、博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型，用益气、化瘀、化痰为治法的中药复方制剂进行干预，同时设相应的阳性西药对照组和模型组。检测肝、肺、肾组织中TGF-β1、HMGB1、MCP-1、TLR、PPARγ及Ln、Fn、Ⅳ型胶原蛋白的蛋白与m RNA表达水平，MMPs、TIMPs、PAI-1含量及活性；观察肝、肺、肾组织病理形态和超微结构。探讨益气、化瘀、化痰法对不同组织器官（肝、肺、肾）纤维化“异病同治”的作用及机理，探索中医防治重要器官（肝、肺、肾）纤维化的途径，提高该治法在指导器官纤维化治疗中的作用。

器官纤维化尤其是肝纤维化、肺纤维化、肾间质纤维化、肾小球硬化等重要器官组织的纤维化，将会导致相应组织器官结构破坏和功能减退，乃至器官功能衰竭，不仅严重威胁人类健康，也给经济社会发展造成严重影响。因此，器官纤维化的预防和治疗，一直是医学界研究的热点，也是现代医学的难点问题。本项目制备了益气法、化瘀法、化痰法、益气化瘀法、益气化痰法、化瘀化痰法、益气化瘀化痰法中药制剂，成功建立了肝、肺和肾纤维化大鼠模型，采用质量可控的益气化瘀化痰法中药复方制剂分别对建立的肝、肺、肾纤维化模型大鼠进行干预，同时设置正常对照和阳性对照实验。通过对肝、肺、肾纤维化组织中与纤维化发生与发展相关的重要代表性指标（TGF-β1、ECM、HMGB1、TLR、PPAR-γ、MCP-1、t-PA/PAI-1 以及 MMPs/TIMPs、t-PA/PAI-1 ）进行了观察与分析，同时对肝、肺和肾纤维化组织进行了病理形态学检测及超微结构的观察。研究结果显示，益气化瘀化痰法组肝、肺和肾纤维化组织形态显著改善；益气化瘀化痰法组肝、肺和肾纤维化组织的所观察指标与模型组相比，有显著改善，部分纤维化组织的代表性指标优于阳性西药对照组，如肝纤维化大鼠肝组织纤维化相关指标结果显示益气化瘀化痰法组ColⅠ、PⅢNP、FN显著下降（P <0.05），其作用优于阳性西药秋水仙碱对照组（P < 0.05）。益气化瘀化痰法制剂组TGF-β1、TβRⅠ、Smad3、α-SMA mRNA表达显著下调（P < 0.05），Smad7、HGF mRNA表达显著上调（P < 0.05），其中部分指标的作用优于秋水仙碱组（P > 0.05）。肾纤维化大鼠肾组织纤维化相关指标检测显示，模型组细胞外基质成分（FN、Col I和Col IV）mRNA表达较假手术组明显上调（P＜0.05），益气化瘀化痰法高剂量组则明显低于模型组（P＜0.05），作用优于阳性西药替米沙坦对照组。本研究在中医药防治器官(肝、肺、肾)纤维化的治法方面具有较大的进展，不仅具有明显的科学意义，而且对临床上中医药防治器官纤维化的立法、处方、选药也具相应的指导意义。