NAIF1在三阴性乳腺癌中表达及其抑制侵袭、转移的机制研究

Triple-negative breast cancers (TNBC) neither express hormone receptors, nor overexpress HER2.They are associated with poor prognosis, as de?ned by low ?ve-year survival and high recurrence rates after adjuvant therapy. However, none of these target therapies focused on metastasis-related gene have yet reached approval level. Intriguingly, we found NAIF1 was down-regulated in TNBC tissue in our earlier study. The results of preliminary experiments showed the expression of NAIF1 was much lower in TNBC with lymph node metastasis than tissue with no metastasis. Overexpression of NAIF1 can inhibit migration and invasion of TNBC cell line. Therefore, we speculate NAIF1 is a TNBC metastasis suppressor gene. To prove this, we will analyse the expression of NAIF1 in normal mammary and TNBC tissues (with no metastasis or lymph node metastasis) to find out the relationship between NAIF1 and TNBC metastasis, examine the DNA methylation status in promoter region of NAIF1 gene to seek out the reason of been down-regulated; then we will study the molecular mechanism of NAIF1 inhibit migration and invasion of TNBC by using TNBC cell line and a metastasis model in nude mice; finally, we will identify the interaction protein of NAIF1 in nuclei by using yeast two-hybrid system for further inverstigation. In short, this study would bring us a novel TNBC metastasis suppressor gene, NAIF1, and provide new strategies and targets for TNBC early diagnosis and target therapies.

三阴性乳腺癌(TNBC) 侵袭早转移快，发生远处转移患者中位生存期显著下降。国内外针对其转移相关基因靶向治疗的研究进展缓慢，是治疗的瓶颈所在。申请者前期研究发现NAIF1在TNBC组织中低表达。预实验中NAIF1在转移/未转移的TNBC组织中表达存在差异，高表达NAIF1能抑制TNBC细胞系的运动侵袭能力。我们推测NAIF1是TNBC恶性转移抑制基因，其渐进缺失与TNBC发生发展有重大关系。为证实此观点，我们将扩大样本深入研究NAIF1在乳腺正常组织、未转移/转移TNBC组织中的表达情况及其与临床病理参数之间的关系，并且探索其低表达原因；以细胞系和裸鼠模型为对象，研究NAIF1抑制TNBC侵袭转移的分子机制及其参与的信号通路；用酵母双杂交法寻找NAIF1的相互作用蛋白以便深入阐明其作用机制。通过本课题可找到一个新的TNBC恶性转移抑制基因，为TNBC的早期诊断及靶向治疗提供新的策略和靶点。

三阴性乳腺癌具有特殊的生物学特性、病理特征及临床病程,针对TNBC恶性转移分子机制的研究，以及治疗靶点的选择，一直是提高乳腺癌治疗效果的瓶颈。本课题在组织水平、细胞水平以及分子水平，对NAIF1在TNBC恶性转移生物学特性方面的影响以及分子机制，进行了初步的研究。首先，分析了84例正常乳腺和129例TNBC组织中NAIF1 的表达水平，发现NAIF1在TNBC中的表达明显低于正常乳腺组织，且与组织分化程度及TNM分期进展呈现相关性。其次， NAIF1能够抑制TNBC细胞系MDA-MB-231的侵袭及转移，抑制MMP-9，MMP-2的表达，抑制FAK的磷酸化，抑制CyclinD1, cdc2的表达，且在血清饥饿和紫外照射的诱导下，NAFI1的高表达能抑制Erk1/2和JNK1/2的磷酸化，但对p38无影响，同时还能抑制JNK1/2的本底表达。随后，我们还发现了采用去甲基化试剂处理MDA-MB-231细胞后，NAIF1的表达水平有所提高，说明其在肿瘤中的低表达是与甲基化存在关联性的。NAIF1的高表达还能导致细胞核蛋白中的NF-κB的亚基P65含量降低。 最后，我们构建了诱饵蛋白质粒pGBKT7-NAIF1，并在人正常乳腺组织cDNA文库中进行了酵母双杂交试验，筛选到与NAIF1相互作用的40个阳性克隆质粒，经过测序及BALST比对，分别属于26种不同的蛋白编码基因，且这26种阳性克隆全部通过了回转验证。对于此结果在细胞水平的结合验证及深入研究正在进行中。综合上述结果，本研究为了解NAIF1在TNBC中的表达，以及对TNBC的恶性侵袭、转移的调控的分子机制奠定了坚实的工作基础。项目资助已发表SCI文章1篇，核心期刊7篇。培养硕士生4名，其中2名已经取得硕士学位，2名在读。项目投入经费49万元，支出30.766万元，各项支出基本与预算相符。剩余经费18.234万元，剩余经费计划用于本项目研究后续支出。