莪术醇干预肝纤维化HSEC及其信号调控作用的研究

Liver fibrosis is a necessary process of a variety of chronic liver diseases to cirrhosis. Our previous study found that extracts of Curcumol can not only promote HSC apoptosis and inhibit secretion of many factors, but also present the function of anti-hepatic fibrosis by influencing the structure and secretion of HSEC. Basing on our view that changes in the ultrastructure and secretion of HSC, HSEC are related to liver fibrosis, and extracts of Curcumol can intervene ultra-structure and secretion of HSEC in hepatic fibrosis. In the study, build animal models of liver fibrosis and HSEC model, detect ET-1, VEGF, CTGF, uPA / uPAR, Perlecan, RhoA, Cdc42, Rac1 and other factors and other indicators by western blot, quantitative PCR, electron microscopy, et al, HSEC ultrastructure will be observed by the methods of immunofluorescence. We aim to clear the targeting site to liver cirrhosis by extracts of Curcumol in the molecular level of the Rho-GTPase signaling pathway so as to provide basis for further use and research of the extracts of Curcumol.

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展必经过程。前期研究发现广西莪术提取物莪术醇可促进HSC凋亡和抑制其分泌，还可通过影响HSEC结构与分泌功能呈现抗肝纤维化作用。提出"肝纤维化与HSC、HSEC 超微结构和分泌功能改变有关，莪术醇通过干预HSEC超微结构和分泌功能参与肝纤维化逆转"观点。拟建立肝纤维化模型和HSEC模型，通过免疫荧光、western blot、定量PCR、电镜技术等方法，选择ET-1、VEGF、CTGF、uPA/ uPAR、Perlecan、RhoA、Cdc42、Rac1等因子和HSEC超微结构等指标，观察HSEC结构与功能改变、Rho-GTPase信号通路及HSEC和HSC之间调节的影响，明确莪术醇干预肝纤维化作用环节及其靶位点，并从莪术醇对Rho-GTPase信号通路的相关分子表达水平阐明血瘀症肝纤维化形成和莪术醇干预肝纤维化的分子机制。为莪术醇开发利用提供更多科学依据。

前期研究已发现广西莪术提取物莪术醇可通过两条途径抗肝纤维化，即诱导肝星状细胞（HSC）凋亡并抑制其分泌，以及作用肝窦内皮细胞（HSEC）的结构、分泌功能。提出“肝纤维化与HSC、HSEC超微结构和分泌功能改变有关，莪术醇通过干预肝窦内皮细胞超微结构和分泌功能参与肝纤维化逆转”的假说。项目通过制备血瘀型肝纤维化大鼠模型和HSEC细胞模型，选择HSEC分泌的ET-1、VEGF、CTGF、uPA/uPAR，LN、ColIV、Perlecan等基底膜成分，以及Rho-GTPase信号通路关键因子RhoA、Cdc42、Rac1等指标，观察HSEC结构、功能与Rho-GTPase信号通路之间的关系，揭示莪术醇抗肝纤维化的分子机制。项目完成了动物模型的制备。完成了HSEC细胞的分离、培养及鉴定，细胞模型制备，各组细胞药物孵育。完成了动物模型和细胞模型各组标本的采集和处理，以及各项指标的检测。完成了数据统计和分析；实验结果的处理。完成了资料汇总，实验总结等工作。已有17篇论文发表，其中国内中文核心期刊收录7篇，SCI收录论文有1篇，申请国家专利1项；项目“广西壮瑶医药防治肝脏疾病的基础研究”获得2018年度广西自治区科技进步奖自然科学类二等奖。培养了本学科研究方向的青年骨干4名。培养了“中医药防治肝纤维化方向”硕士研究生2名，协助培养博士研究生1名，在读研究生3名。项目取得了如下重要结果：（1）揭示了莪术醇对肝纤维化动物模型HSEC分泌功能的作用。（2）阐明了莪术醇对HSEC的结构、功能干预的相关靶点。（3）明确了血瘀型肝纤维化病变时HSEC结构或功能改变、肝窦毛细血管化和肝内微循环障碍及其形成机制。揭示了莪术醇通过干预HSEC结构、功能的改变呈现抗肝纤维化的分子机制，为莪术醇防治肝纤维化提供了更全面的实验依据，为抗肝纤维化研究提供了新的靶点及思路。本项目的实施还培养了一支协同创新的科研骨干团队，一定程度上推进了少数民族地区的人才培养。