红芪多糖对早期DN小鼠CTGF、TGF-β1、IGF-1、VEGF表达及肾ECM的影响

本研究以参与肾间质纤维病变的重要致病因子-结缔组织生长因子（CTGF）为中心，采用分子生物学技术观察红芪多糖对早期DN小鼠肾间质中CTGF、TGF-β1、IGF-1、VEGF的mRNA和蛋白表达的影响，同时观察作为CTGF致病作用靶点因子的细胞外基质中IV型胶原（C-IV）、纤连蛋白（FN）的mRNA和蛋白表达的影响，并在此基础上，采用形态学的研究方法观察肾细胞外基质（ECM）的超微结构变化，以及红芪多糖对上述因子的影响。从而探讨在早期DN纤维化过程中CTGF和TGF-β1、IGF-1、VEGF的独立及相互间作用，及其与肾ECM中C-IV、FN的积累间的相互关关系。从肾间质纤维化的信号调控、相关因子的相互作用与改善肾脏基质积累的角度综合系统地阐明早期DN的肾纤维化过程中肾气亏虚，化生浊瘀的中医病机理论的现代机制，以及中药红芪多糖防治早期DN纤维化的分子机制，为中医药防治早期DN提高科学依据

糖尿病肾病（DN）是糖尿病最常见、最严重的慢性微血管并发症之一，在肾功能损害进展过程中肾间质纤维化的危害起了重要作用，是糖尿病肾病进展为终末期肾病的根本病理改变之一。该病目前尚缺乏有效的治疗手段和方法，因此如何对DN肾脏纤维化进行及早防治，控制和延缓其进一步发展，是目前中西医研究的热点。本研究选用红芪多糖（HPS）对DN模型db/db小鼠进行干预治疗，利用现代分子生物学等技术，从分子水平和超微结构变化观察HPS对DN肾纤维化过程中细胞外基质代谢及对转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、胰岛素样生长因子1（IGF-l）等关键指标及与肾ECM中C-IV、FN的影响，探讨其作用机制，为DN肾组织纤维化的发病机制提供理论依据并丰富和深化DN发生发展中肾气不足，浊毒内生学说。. 本项目完成了项目标书涉及的研究内容，并根据研究充分论证的基础上，增加和调整了如下内容：①增加了p38MAPK、 MMP2、TIMP-1、AGEs和NF-κB等观察指标。②在第二阶段研究中为确保db/db小鼠处于DN早期，改用6周龄db/db小鼠作为观察对象。③第一阶段使用的阳性对照药物为ACEI类的依那普利，第二阶段换用ARB类的替米沙坦。④因第二研究阶段选用的db/db小鼠周龄偏小，对HPS剂量进行调整，HPS高、中、低剂量组分别给予HPS 200、100、50mg.kg-1.d-1灌胃。第一阶段，以TGF-β1、CTGF、VEGF、C-IV、FN等参与肾间质纤维病变的重要致病因子为观察指标，并对血糖、血脂、24h尿蛋白、肾脏病理学、等关键指标进行疗效评价。实验结果显示：HPS能够在一定程度上抑制血糖升高，降低db/db小鼠体重，减少糖尿病肾病小鼠蛋白尿，减缓肾间质纤维化的发生。第二阶段，选用6周龄db/db小鼠作为观察对象。实验结果显示：HPS对血糖、24h尿蛋白的改善情况明显优于第一阶段，且HPS中剂量组疗效优于替米沙坦组。说明HPS对早期DN具有明显的治疗效果。在上述研究基础上，撰写论文多篇，已录用发表7篇，其余多篇文章正在撰写投稿中。本研究升华了DN的中医病机理论，为HPS防治糖尿病及其并发症提供了科学理论依据，对早期预防和治疗糖尿病肾病、寻找有效治疗药物有重要意义。