药用昆虫美洲大蠊抗肝纤维化肽/糖肽及其对HSC与相关细胞因子表达的影响

Active site of ML-D, which was got from previous studies of Periplaneta Americana done by the research team, has significant effects on anti hepatic fibrosis(HF) . Preliminary studies indicate that the material composition of the active site is peptides / glycopeptides and 9 peptides were isolated and identified. But the mechanism of action and material basis of ML-D’s are not clear, so further research will cover the following: . ①Under the active track, compounds are isolated from ML-D using GPC, PE etc. and compounds will be identified using MS， spectrum, N-terminal amino acid sequencing of peptides etc.. ②To study the effects of the ML-D on hepatic pathology and histomorphology of experimental mice with hepatic fibrosis and the changes in extracellular matrix(ECM) levels of HA,LN,PC-Ⅲ,C-Ⅳ,TGF-β and COL.. ③In order to clarify ML-D’s target, inhibitory action of ML-D on hepatic stellate cells(HSC) will be researched, the study including HSC replication cycle of adsorption, integration, transcription, protease and integrase enzyme .. ④To explore how the effects of ML-D on the hepatic fibrosis tissues and the expressions of MMP and mRNA ..The result will be become the foundation of a new anti hepatic fibrosis drug that is safe, effective and resource-rich.

课题组对美洲大蠊的前期研究中，获得了抗肝纤维化（HF）作用显著的活性部位ML-D，前期研究表明，组成该活性部位的物质为肽/糖肽，并分离鉴定出9个肽，但其作用机制和物质基础尚不明确，需进一步研究，内容包括： . ①在活性追踪下，采用GPC、PE等技术系统分离ML-D中的化合物，并采用MS、波谱、多肽N端氨基酸测序等技术确定化合物结构；. ②研究ML-D对实验性肝纤维化小鼠肝组织病理形态的影响，及细胞外基质（ECM）中HA,LN,PC-Ⅲ,C-Ⅳ,TGF-β,COL等细胞因子的变化水平；. ③研究ML-D对肝星状细胞（HSC）复制周期的吸附、融合、转录、蛋白酶、整合酶等多个靶标的抑制作用，明确其作用靶标；. ④探讨ML-D对HF大鼠肝组织中MMP与mRNA表达的影响。.研究成果将为研发出一种安全、有效、资源丰富的抗肝纤维化新药奠定基础。

课题组对美洲大蠊的前期研究中，获得了抗肝纤维化（HF）作用显著的活性部位ML-D，研究表明，组成该活性部位的主要物质为肽/糖肽，但其作用机制和物质基础尚不明确，本课题在上述研究的基础上，进行了如下研究：. 1.进一步优化美洲大蠊抗肝纤维化活性部位的提取工艺，其得率有较大提高；. 2.在体外活性追踪下，系统分离活性部位的物质基础，研究了其肽、糖、氨基酸的组成；. 3.研究了活性部位对实验性肝纤维化大鼠和HSC相关细胞因子、蛋白表达的影响，明确其作用靶标。. 通过研究，现已按预定目标完成了相关内容，取得以下成果：. 1.通过酶解工艺，结合活性实验，优选出美洲大蠊抗肝纤维化活性部位的提取工艺，ML-D的得率从0.6%提高到约0.9%；. 2.研究阐明了ML-D中氨基酸、肽、糖肽含量，从中分离得到部分化合物，并建立了ML-D的质量标准和HPLC指纹图谱；. 3.通过体内外实验，阐明了ML-D对HSC复制过程中相关细胞因子、蛋白表达的影响机制；. 4.研究还发现，美洲大蠊提取物具有免疫调节作用，这是否与其治疗HF有关，有待深入研究；. 5.培养了7名硕士研究生；公开发表18篇论文；申请1项发明专利；获1项国家工业产品行业标准。. 该项目的实施，优化了美洲大蠊抗肝纤维化活性部位的提取工艺，阐明了抗肝纤维化活性部位中肽/糖肽对HSC及肝纤维化大鼠相关细胞因子表达的影响，基本明确了美洲大蠊抗肝纤维化活性部位ML-D的物质基础，研究成果为进一步研究美洲大蠊抗肝纤维化新药奠定了重要基础。研究还发现美洲大蠊提取物有免疫调节作用，其作用机制有待进一步研究。