PD-Ls分子信号介导黄芪多糖调控EAE小鼠神经小胶质细胞活化的分子机制研究

中枢神经系统自身免疫病多发性硬化是一种严重危害人类健康的疾病，其发病机理仍不清楚，临床上缺乏有效的治疗药物。本项目是在前期研究工作的基础上，以实验性自身免疫性脑脊髓膜炎EAE作为多发性硬化的动物模型，探讨中药黄芪多糖对EAE小鼠的治疗作用；运用现代免疫学和分子生物学的理论和方法，从体内、体外实验两方面，分别在转录和翻译水平上，探讨黄芪多糖对EAE小鼠神经小胶质细胞活化的调控；进一步运用"基因敲除"小鼠和"骨髓移植嵌合体"技术，进行阻断实验，探讨黄芪多糖对活化小胶质细胞上协同刺激分子PD-Ls(PD-L1、PD-L2)信号通路的影响，藉以阐明黄芪多糖调控EAE小鼠神经小胶质细胞活化的分子机制，揭示黄芪多糖治疗中枢神经系统自身免疫病的新靶点。本项目至今在国内外尚无报道，具有鲜明的创新性，属跨学科研究的前沿课题，对于神经系统疾病的治疗和新药研发、促进中医药学的现代化发展，具有重要的科学意义。

结题摘要：..本项目基于中枢神经系统自身免疫性疾病多发性硬化是一种严重危害人类健康的疾病，在前期研究工作的基础上，本项目旨在探讨中药黄芪多糖对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎EAE的治疗作用， 已经成功建立了中枢神经系统自身免疫性疾病多发性硬化的EAE小鼠模型，发现黄芪多糖对EAE小鼠的临床表现具有治疗作用。并对其免疫调节作用机制进行了深入研究。观察了黄芪多糖对EAE小鼠脊髓炎症细胞浸润的影响，发现其有效抑制中枢神经系统的炎症反应。从免疫调节作用对黄芪多糖治疗EAE模型小鼠的细胞分子机制进行了深入研究，发现黄芪多糖对MOG35-55特异性T细胞增殖具有良好的调节作用。采用ELISA法检测脾脏MOG35-55特异性T细胞培养上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-17、IL-4、IL-10的水平，发现黄芪多糖对MOG35-55特异性T细胞产生细胞因子水平具有良好的调节作用。进一步研究发现，黄芪多糖能够抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞的激活，黄芪多糖作用于LPS刺激的BV-2小胶质细胞后，能够促进BV-2细胞表面免疫共刺激分子PD-L1蛋白及基因表达的上调。从而，揭示了PD-Ls分子信号介导黄芪多糖调控EAE小鼠神经小胶质细胞活化的分子机制。