苄基苯乙胺类生物碱抗乙肝病毒活性及其作用机制研究

鉴于苄基苯乙胺类生物碱为新型的非核苷类HBV抑制剂，本申请拟通过植物中该类生物碱的分离与结构测定，结构修饰与合成等方法制备苄基苯乙胺类生物碱及其类天然产物库；以此作为物质基础，开展抗HBV活性、细胞毒性及其构效关系研究；在此基础上探讨不同类型苄基苯乙胺类生物碱抗HBV的作用机理，发现新的抗HBV非核苷类先导化合物。在HBV全基因转染的细胞培养内，通过新的技术手段（RT等病毒酶测定， 芯片技术、iRNA等技术），对优选化合物在病毒和人体细胞内可能抑制HBV复制相关靶点和毒性，并进一步证实优选化合物与临床用药联合作用和在体内（Duck HBV）的抗病毒效果，为抗HBV新药候选化合物提供科学依据。

1）植物成分的化学研究：从各种石蒜属植物中分离鉴定苄基苯乙胺类生物碱101个，其中新结构化合物5个；从其它植物中分离鉴定化合物197个，其中新颖碳骨架化合物19个，新结构化合物37个；以石蒜碱、石蒜西定为原料，合成各类衍生物160个。2）抗乙肝病毒活性筛选：抗HBV活性筛选338样次，发现抗HBV活性化合物31个。研究发现氧化苦参碱（OMTR）特异性抑制胞内Hsc70，机制为OMTR作用于Hsc70 mRNA 3′-UTR，通过抑制胞内Hsc70水平发挥抗HBV活性；在此基础上研究了具有抗HBV活性的石蒜生物碱抑制寄主细胞HepG2的热休克蛋白Hsc70合成以及下调Hun 7.5宿主细胞中Hsc70的mRNA的表达作用。3）研究发现部分抗HBV生物碱同时具有抗HCV活性，其抑制HCV核心蛋白和下调Hsc70 mRNA的作用呈正相关；以石蒜碱衍生物为先导物，设计、合成了两个系列简化类似物，系统研究了抗HCV的构效关系并进行了结构优化。4）发现了抗HCV活性成分具有协同激活Wnt信号通路的作用，其具有新颖的作用机制和作用靶点；以HLY78为先导物，设计合成了系列衍生物并讨论了其构效关系。