半夏泻心汤干预骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎的“环境调和”机制研究

干细胞移植是治疗溃疡性结肠炎（UC）的新途径，寻找促进干细胞定向分化的方药是提高干细胞治疗UC疗效的关键之一。结合前期相关工作基础，提出了"调和胃肠"半夏泻心汤干预干细胞治疗UC的"干细胞治疗的环境调和"假说。研究拟采用改良的TNBs/乙醇溶液灌肠法制备大鼠UC模型，局部定位注射移植骨髓间充质干细胞（BMSCs），应用ELISA、RT-PCR等方法，观察局部溃疡损伤、BMSCs定向分化表达、Th1/Th2免疫平衡细胞因子表达、微环境细胞因子表达、微环境Wnt与Notch信号通路关键因子水平等内容，探讨半夏泻心汤干预BMSCs治疗UC的作用及作用机制，从整体免疫环境调和、局部微环境调和角度，阐释"环境调和"的科学内涵，为调控干细胞分化的"调和胃肠"方药选择思路提供实验支持。本研究将为UC治疗采用半夏泻心汤与干细胞优势互补治疗方案提供实验依据，提高干细胞疗效的联合用药的选择提供新的思路与方法。

实现方药与干细胞治疗疾病时的优势互补作用是课题组的研究目的。课题组突破以往常用补益药、活血化瘀药物的选药思路及相关理论，提出了“调和脾胃”药物与干细胞优势互补联合治疗UC的方案，以及选药思路的“干细胞治疗的环境调和说”科学假说。围绕该假说进行了实验研究及文献研究。实验研究以TNBS/乙醇诱导的大鼠UC为研究对象，采用DAI、CMDI等指标评价应用半夏泻心汤、骨髓间充质干细胞（BMSCs）、半夏泻心汤+骨髓间充质干细胞治疗UC后的疗效，采用ELISA测定了大鼠血清及结肠组织的IL-6、IL-2、IFN-γ、TNF-α、CD4+、IL-10、IL-4、CD8+等细胞因子，采用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot法测定各组结肠组织的SDF、Wnt-1、β-Catenin、Notch1、rHes1、JAK2、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA及部分蛋白表达，探讨了半夏泻心汤干预BMSCs治疗UC作用及Th1/Th2平衡、促迁移作用、Wnt/Notch、JAK/STAT信号通路的作用机制；文献研究采用了Meta分析、复杂系统熵聚类、无监督的熵层次聚类、关联规则等方法对相关文献进行了分析。研究发现：（1）半夏泻心汤及其联合BMSCs对UC大鼠具有治疗作用，其作用机制可能与调节UC大鼠Th1/Th2平衡失调有关。（2）半夏泻心汤对BMSCs治疗UC有增效作用，这种优势互补作用可能与下调Notch1、rHes1、JAK2、STAT3、STAT4、STAT6 的mRNA及蛋白的表达有关，即可能通过调节Notch/STAT信号通路起作用；同时研究发现，半夏泻心汤单独应用治疗大鼠UC时降低上述指标的作用不明显，提示半夏泻心汤治疗UC的作用机制与其联合BMSCs治疗UC的作用机制可能不同。（3）该优势互补作用与半夏泻心汤促进BMSCs迁移至溃疡组织的作用关系不明显，但有待进一步研究确定。（3）该优势互补作用可能与半夏泻心汤促进BMSCs体内外增殖有关。上述研究阐释了半夏泻心汤与BMSCs治疗UC优势互补作用及机制，初步验证了课题组提出的“环境调和”的科研假说，为BMSCs治疗UC时联合应用中药思路提供了借鉴。