食管癌新候选抑癌基因PSCA的分子抑癌机制及其临床意义研究

食管癌的发生发展是一个涉及多因素、多阶段、多基因变异累及相互作用的复杂过程。通过基因芯片比较在10例食管鳞癌和其对应正常组织中基因表达特征，筛选和确定新的食管癌相关抑癌基因PSCA，并从功能上初步证实该基因具有潜在的抑癌基因作用，然而，PSCA基因在食管癌中的分子致癌特征目前还不清楚。我们拟通过半定量RT- PCR，染色质免疫共沉淀（ChIP），荧光素酶报告试验，RNA干扰技术来研究PSCA失活机制；通过PCR扩增及直接测序来分析食管癌高发区河南林州人口中rs2294008与食管癌的关联性；通过细胞生长实验，集落形成实验，软琼脂试验和裸鼠肿瘤形成实验，进一步研究PSCA在食管癌中的作用；通过组织芯片免疫组化技术分析食管鳞癌中PSCA失活的临床意义。本项目不仅有助于研究食管癌发生发展的分子基础，而且可能为其临床诊断和预后判断提供分子标记物，同时可能为食管癌的病因治疗提供重要的分子靶点。

越来越多的证据表明，肿瘤的发生是多因素作用的结果，与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。我们课题组应用基因芯片和RT-PCR技术发现前列腺干细胞抗原（PSCA）在食管鳞状细胞癌(ESCC)中显著下调，免疫组化也是同样的结果。为了明确PSCA在ESCC发生发展中发挥的重要作用，我们将pGL3-PSCA、pGL3-Control转染入ESCC细胞系EC18和KYSE140，通过体外试验（如XTT、平板克隆试验、软琼脂试验等）及裸鼠体内成瘤实验分析PSCA的生物学功能，发现PSCA抑制ESCC的发生发展。我们应用RT-PCR发现在ESCC中Sox-5的表达与PSCA的表达负相关，应用染色质免疫共沉淀法和荧光素酶法得到了进一步的验证，很有意思的是，我们应用RNAi 敲除Sox-5的表达，发现PSCA的表达明显上调，细胞的恶性侵袭能力明显降低，为我们治疗肿瘤提供了新的方向。我们检测外周血发现PSCA的风险T等位基因在健康者中的频率明显低于其在ESCC中的频率，可能为ESCC的病因治疗提供重要的分子靶点。本课题已完成，文章已投到Cancer Research,正在审稿中。