IRE 1α/XBP-1途径调节的C/EBPbeta促进高甘油三酯血症性急性胰腺炎早期炎症反应的机制研究

The clinical course of hypertriglyceridemic pancreatitis (HTGP) is often more severe type and the exact machanisms involved in HTGP are unclear.In previous study,we found up-regulation of sXBP-1 is associated with HTGP,but the role is unknown.Recently,some foreign studies discovered C/EBPbeta in IRE1α/XBP-1 pathway which regulates the inflammation.Our study aim to detect ：（1）In the animal model of hypertriglyceridemic acute pancreatitis,we study the expressiosn of C/EBPbeta in IRE1α/XBP-1 pathway associated with the pathologic changes and exocrine function of pancreas and inflammation in early stage of HTGP.We hope to verify that C/EBP? in IRE1α/XBP-1 pathway participated in pathogenesis of HTGP.(2)By using siRNA and shRNA of C/EBPα and up-regulation of C/EBP?,we aim to confirm the expression of C/EBP? was regulated by axis of sXBP-1-C/EBPα-CEBP/?.The results of our study will provide a theoretical basis in prevention and therapy in HTGP.

高甘油三酯血症性急性胰腺炎（hypertriglyceridemic pancreatitis, HTGP）的病情多呈重症化，发病机制尚需深入研究。前期实验发现，HTGP中胰腺的病理改变与sXBP-1的表达上调呈现相关性，但作用不明。近期国外研究发现，调控炎症反应的CCAAT增强子结合蛋白?（C/EBP?）的表达受内质网应激的IRE1α途径调控。本课题从两方面研究：（1）构建高甘油三酯血症急性胰腺炎动物模型，观察IRE1α/XBP-1途径中C/EBPβ相关分子的表达与胰腺形态、外分泌功能和早期炎症反应的相关性，证实经该途径调节的C/EBPβ参与了HTGP发病过程；（2）应用siRNA和shRNA下调C/EBPα，瞬转和稳转胰腺腺泡细胞，腺病毒表达载体表达上调C/EBP?，阐明C/EBPβ的表达是受sXBP-1-C/EBPα-C/EBPβ轴调控，为防治HTGP提供理伦依据。

本课题研究了内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）通路IRE1α / XBP-1、核转录因子C/EBPβ、C/EBPα在HTGP早期炎症反应中的作用及调控机制。结果发现：（1）C/EBPα、C/EBPβ和ERS相关分子（IRE1α和sXBP1）在高甘油三酯血症性急性胰腺炎(HTGP)中的表达变化：结合体内实验（高脂饮食喂养和雨蛙肽腹腔注射成功建立HTGP大鼠模型）和体外实验（分离大鼠胰腺腺泡细胞，予棕榈酸（palmitic acid，PA）预孵育，再予CCK-8 刺激）。结果发现：高甘油三酯血症（HTG）加重急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）大鼠的病情、胰腺损伤和炎症反应。同时，胰腺内的ERS相关通路IRE1α/XBP-1、C/EBPβ和C/EBPα的表达呈现平行升高。（2）不同剂量槲皮素减轻HTGP早期炎症反应的疗效及机制探讨：HTGP大鼠腹腔内注射不同剂量的槲皮素（100、150、200mg/kg）。分离大鼠胰腺腺泡细胞，予PA和不同浓度的槲皮素（5、10、20、40umol/L）预孵育后，予CCK-8刺激。结果发现：槲皮素呈剂量依赖性地减轻HTGP炎症反应，降低IRE1α、sXBP1、C/EBPα和C/EBPβ的基因和蛋白水平。（3）ERS中IRE1α/XBP-1通路与C/EBPβ、C/EBPα的关系：分离大鼠胰腺腺泡细胞，予PA孵育，分别采用siRNA技术下调胰腺腺泡细胞中C/EBPβ、给予ERS抑制剂4-PBA（ 5、10、20、40 mM）和运用ERS诱导剂thapsigargin（0.1、0.3、1、2 mM）孵育。再予CCK-8刺激。结果发现：PA预处理可诱导胰腺腺泡细胞ERS、C/EBPβ、C/EBPα和炎症反应；抑制ERS，可导致C/EBPβ表达下调，炎症反应减轻；诱导ERS，可导致C/EBPβ表达上调，炎症反应加重。抑制C/EBPβ，可导致C/EBPα.表达下调，但对ERS无影响。因此我们推论：在HTGP中，ERS中的IRE1α/XBP-1途径和C/EBPs存在相关性，ERS- C/EBPβ- C/EBPα- 炎症反应轴可能是HTGP发生严重炎症反应的一条重要的信号通路。