基于WNT通路的透脓散抗溃疡性结肠炎的机制研究

Active ulcerative colitis is always accompanied with crypt abscesses, ulcers after crypt abscesses. Thereafter, recurrent ulcers can lead to inflammatory polyps, scarring, and even colon cancer. How to induce the pus out, promote ulcer repair and prevent scarring is the focus and difficulty. In this study, we use tou nong san, the typical formula of promoting eruption and draining toxin methods, which is essential for treating surgical intractable sores and ulcers, to observe the effect on the trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) -induced ulcerative colitis in rats. The research method include using biopsy (HE staining ) to observe colonic mucosa damage index and colon TEM ultrastructural changes, using ELISA assay to check TNF-a, IL-1, IL-10 in serum, using molecular biology techniques to detect the expression of TGF-β1 and bFGF mRNA, testing Wnt/ B-catenin signaling pathway downstream of activated factor and expression level of the gene expression product. This study is to explore the mechanism of treatment of ulcerative colitis by promoting eruption and draining toxin methods through the study of tou nong san.

溃疡性结肠炎活动期伴随隐窝脓肿，隐窝脓肿溃破后出现溃疡，反复溃疡又可导致炎性息肉、瘢痕形成，甚至发生结肠癌变。如何及早透脓外出，促进溃疡面修复，防止瘢痕形成，是溃疡性结肠炎研究的难点和重点所在。本研究采用外科难治性疮疡、溃疡的思路“托里透毒法”，以透脓散为研究对象，以三硝基苯磺酸(TNBS)所致大鼠溃疡性结肠炎模型为工具，采用病理切片（HE染色）观察结肠黏膜损伤指数，透射电镜观察结肠超微结构改变，ELISA 法检测各组大鼠的血清 TNF-a、IL-1、IL-10的水平，观察透脓散对溃疡性结肠炎大鼠模型治疗作用。利用分子生物技术，检测TGF-β1及bFGF mRNA的表达量，检测Wnt/B-catenin信号通路相关因子及激活后下游基因表达产物表达水平，阐明透脓散对溃疡性结肠炎的作用机制，寻找其主要作用靶点及调控环节。旨在以透脓散为研究范例，探讨托里透毒法治疗溃疡性结肠炎的作用及机理。

以透脓散为代表的托里透毒法是以"补益与透毒"相结合的治法治疗疾病的有效特色方法，其对多种内外科溃疡具有良好的疗效，但是其对溃疡性结肠炎的疗效及机制缺乏深入研究。根据研究计划，主要研究内容如下：1、理论探讨托里透毒法治疗溃疡性结肠炎的合理性；2、基于wnt通路探讨透脓散对大鼠结肠炎模型的干预作用；3、运用分子生物学技术探讨透脓散对结肠炎大鼠肠道炎症的干预作用。研究结果、关键数据及意义：1、"脾虚"和"血瘀"是溃疡性结肠炎黏膜难愈合的中医病机，托里透毒法补益与透毒并举，为治疗溃疡性结肠炎的有效治法。2、建立了透脓散水煎液的体外指纹图谱，并对其中的特征成分进行指认，进而对透脓散水煎液进行质量评价。其中有6个主要的波峰得到了明确指认：毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、阿魏酸、洋川芎内酯I，稳定性实验结果表明透脓散水煎液成分稳定。2、采用TNBS与无水乙醇混合溶液灌肠法建立溃疡性结肠炎模型，病理切片证实模型复制成功。采用分子生物学方法检测肠道组织中TGF-β1及bFGF mRNA的水平和wnt蛋白的含量。检测结果发现，阳性组TGF-β1及bFGF mRNA水平明显高于模型组，透脓散干预组相比模型组虽有升高，但无显著统计学意义。透脓散低剂量和中剂量组中wnt蛋白水平较模型组显著降低，但是高剂量组较模型组反而升高。提示透脓散抑制wnt通路的最佳剂量为低剂量和中剂量。3、探讨透脓散对结肠炎大鼠炎症的影响及其作用机制。ELISA及RT-qPCR结果表明，透脓散干预后炎症因子水平得到明显抑制，进一步的机制实验表明透脓散主要是通过抑制NF-KB通路来达到抗炎作用。本课题从传统和现代角度探讨了托里透毒法对溃疡性结肠炎的作用及其机制，为进一步的研究打下了坚实基础。