基于STAT6通路研究安喘颗粒调节Th2/Treg细胞亚群治疗哮喘的机制

Asthma is a complex and refractory airway inflammatory disease. Th2 cell activation is an important link in the pathogenesis of asthma. The activation of STAT6 pathway plays an important role in the activation of Th2 cells, and the activation of STAT6 can inhibit the activation of Treg cells, which leads to the imbalance of Th2/Treg cell subsets. Anchuan granules is a preparation of the hospital and the drug has obtained the national patent. The drug has achieved a number of clinical and experimental research results. The pretest verified that it effectively controlled the level of asthma Th2/Treg cell subsets. So we speculate that the molecular mechanism of the effect of inhibit inflammation is to regulate the STAT6 signaling pathway. Based on this, this study intends to establish a mouse model of OVA induced asthma to observe the effectiveness of the treatment and the effects of drug in STAT6 pathway and Th2/Treg cell subsets from the whole level. And this study intends to intervene CD4+ T lymphocytes through containing serum of Anchuan granules, separate Th2, Treg cells for the second time with immunomagnetic beads method, then detect the levels of IL-4, IL-10 and other cytokines and STAT6 signaling pathway from the cellular level to reveal its mechanism. This study provides a scientific basis for the treatment of asthma, and provides a new idea for the treatment of asthma.

哮喘是一种复杂难治的气道炎症疾病，Th2细胞活化是哮喘发病的重要环节。STAT6通路的激活在Th2细胞活化中扮演着重要作用，同时STAT6的激活还可抑制Treg细胞活化，从而导致Th2/Treg细胞亚群失衡。安喘颗粒为本院院内制剂，已取得多项临床及实验研究成果并获得国家发明专利。预实验证实安喘颗粒可有效调控哮喘Th2及Treg细胞亚群水平，因此我们推测其抑制炎症的分子机制是通过调控STAT6信号通路发挥作用的。基于此，本课题拟建立小鼠OVA致敏哮喘模型从整体水平观察安喘颗粒对哮喘小鼠治疗的有效性及对STAT6通路及Th2/Treg细胞亚群的影响。以及细胞水平通过安喘颗粒含药血清干预CD4＋T淋巴细胞，后二次分选Th2、Treg细胞，检测IL-4、IL-10等细胞因子及STAT6信号通路变化水平，揭示其作用机制。本研究为安喘颗粒治疗哮喘提供科学依据，并为寻找新的哮喘治疗药物提供思路。

哮喘是一种复杂难治的气道炎症疾病，安喘颗粒为本院院内制剂，已取得多项临床及实验研究成果并获得国家发明专利。本研究旨在从STAT6通路研究安喘颗粒调节Th2/Treg细胞亚群，说明其分子机制。本研究内容包括四个方面，主要目标完成情况如下：1.安喘颗粒的物质基础研究：基于超高效液相串联四极杆飞行时间质谱技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）对安喘颗粒的化学成分进行定性分析。确立36种主要化合物。2.从整体水平研究安喘颗粒对哮喘小鼠模型Th2/Treg细胞亚群的影响：OVA小鼠BALF中Th2细胞比例明显升高，安喘颗粒低剂量组、高剂量组能减少Th2细胞比例，同时增加小鼠Treg细胞比例。经过安喘颗粒治疗后，OVA小鼠血清中炎症因子IL-4，IL-13均显著下降，同时IL-10大幅度升高。本实验揭示了安喘颗粒可以有效治抑制Th2细胞及相关炎症因子、并增加Treg细胞及其炎症因子的相对含量，恢复哮喘Th2/Treg细胞亚群失衡。3.安喘颗粒调控CD4+细胞STAT6信号通路的作用机制：随着安喘颗粒含药血清浓度的逐渐升高，p-STAT6蛋白水平逐渐降低，由此证明安喘颗粒可以降低STAT6蛋白的磷酸化水平，从而抑制Th2细胞活化，进而发挥其治疗作用。4.安喘颗粒治疗哮喘的网络药理学研究：本研究采用基于网络药理学的方法阐明安喘方治疗哮喘的潜在的多组分、多靶点、多途径的作用模式。本研究结果表明，安喘方主要生物过程与白细胞分化和增殖、炎症细胞因子的生物合成和释放、细胞对LPS的反应、免疫炎症反应的调节和细胞死亡有关，参与的前5个途径包括TNF途径、Toll样受体途径、Th17细胞分化相关途径、核苷酸结合寡聚结构域（NOD）样受体途径和NF-kappaB途径。为进一步研究本方治疗哮喘的机制提供了思路。综合以上，本研究确立本复方的主要成分和作用靶点，从分子水平揭示安喘颗粒治疗哮喘的机制，证明其科学性，并为寻找新的哮喘治疗药物提供思路。