Th17/Treg细胞亚群功能失衡对支气管哮喘气道炎症调节作用的研究

目前广泛认为 Th1/Th2细胞亚群功能失衡对于推动支气管哮喘（简称哮喘）的气道炎症进展有着重要作用。近年研究发现一个新的CD4+T细胞亚群即Th17细胞。Th1、Th2、Th17以及调节性T细胞（Treg）细胞在分化调节上存在相互影响，而Th17和Treg细胞间更是在分化过程和功能学上存在较为明显的相互对抗。因而，有学者提出疾病免疫机制中除存在"Th1/Th2平衡"，还存在"Th17/Treg平衡"。这个观点已在诸如类风湿关节炎等疾病中已得以验证，但是目前尚无Th17/Treg细胞亚群功能失衡对哮喘影响的深入研究。本研究课题拟探讨①Th17/Treg细胞亚群功能失衡是否推动了哮喘的病情进展，②Th17/Treg细胞亚群功能失衡是否影响到Th1/Th2细胞亚群功能失衡等等，通过这些问题的探讨试图有利于完善补充哮喘发病的炎症机制，从而为哮喘的防治提供理论依据及新思路。

研究背景及目的：我们原计划研究Th7细胞与调节性T（Treg）细胞可能存在的失衡及其对哮喘的影响和机制。但近3年陆续有4篇文献报道。在此基础上我们试图进一步探讨：①调节Th17细胞分化的机制？②中性粒细胞炎症对Th17细胞气道局部募集作用的机制？③Th2细胞炎症的抑制对Th7细胞的影响？④Th17细胞及Tc17细胞在哮喘气道炎症中作用的异同？.方法：①收集哮喘患者外周血，分离单个核细胞，使用实时定量PCR技术检测AhR的mRNA，通过ELISA技术检测血浆IL-22蛋白定量；②体外培养高分泌IL-17A的小鼠淋巴瘤细胞系EL-4，对其表面Toll样受体2（TLR-2）进行干预，ELISA法检测培养上清液中的IL-17A蛋白，实时定量PCR技术检测细胞内IL-17A和RORγτ的mRNA；③哮喘患者吸入沙美特罗替卡松后，收集外周血，ELISA法检测血清中IL-21和IgE蛋白；④制备哮喘小鼠模型，分别体内体外干预中性粒细胞分化的趋化因子CCL2、CCL20，观察其对Th17细胞的趋化作用。⑤干预IL-4和IL-5，观察其对哮喘的影响。⑥通过流式细胞技术检测哮喘患者外周血中Th17和Tc17细胞比例，通过免疫荧光技术检测哮喘小鼠肺组织中Th17和Tc17细胞比例。.结果：①哮喘患者中外周血IL-22蛋白和AhR的mRNA明显增高，IL-22与哮喘肺功能指标FEV1%，FEV1/FVC%存在负相关，与哮喘严重度评分正相关。②TLR-2配体可通过受体增加RORγτ的mRNA，及IL-17A的转录和翻译。③哮喘患者血清IL-21与IgE负相关。④哮喘小鼠血清中CCL2、CCL20各自表达较正常组有所增高，哮喘小鼠BALF中CCL2表达较正常组增高，CCL20表达却比正常组低。BALF中CCL2含量与BALF内中性粒细胞数目有一定的相关性。哮喘小鼠外周血Th17细胞比例及其上面的受体CCR2、CCR6较正常组增高。CCL2、CCL20对Th17细胞具有一定的趋化作用。⑤IL-4和IL-5的干预可抑制哮喘气道炎症及气道重塑。⑥哮喘中Th17和Tc17细胞比例增高。.结论：Th17细胞分泌的IL-22在哮喘中发挥一定作用。其细胞受表面受体TLR-2在细胞活化中发挥重要作用。Th17细胞受到中性粒细胞炎症的募集影响。Th7细胞和Tc17在哮喘中均增加。