LINC00160作为ceRNA介导miR-149-5p靶向调控IL6/Stat3信号通路参与OA发病机制的研究

Non-coding RNAs (miRNA and LncRNA) play critical roles in the development of osteoarthritis (OA). Our previous studies showed that the miRNA expression profile was dysregulated in OA cartilage tissues (Rheumatology 2019; J Mol Med 2017), and the downregulation of miR-149-5p could promote OA through the IL6/Stat3 signalling pathway. We presume that LncRNA acts as a ceRNA to sponge miR-149-5p, leading to decrease in its expression, which contributes to OA development. LncRNA array shows that LINC00160 level is higher in OA. Thus, in this programme, which miRNAs are sponged by LINC00160 will be further identified using bioinformatics and pull-down technique, and to investigate silencing or overexpression of LINC00160 on the chondrocyte proliferation, apoptosis, extracellular matrix and IL6/Stat3 signalling pathway. Furthermore, we will observe the effect of LINC00160 silencing on the OA through the establishment of OA model, providing theoretical basis for clarification of OA pathogenesis. Most importantly, these results can provide a novel therapeutic strategy for OA.

非编码RNA（miRNA、LncRNA）在骨性关节炎（osteoarthritis，OA）发病机制中扮演重要的角色。课题组前期研究发现，OA软骨中miRNA表达谱异常（Rheumatology 2019；J Mol Med 2017），低表达的miR-149-5p靶向IL6/Stat3信号影响其下游基因表达，进而加速软骨退变。我们推测可能是LncRNA作为ceRNA吸附miR-149-5p，导致其表达量下降，参与OA的发生。我们前期LncRNA芯片结果显示OA软骨组织中LINC00160呈高表达状态。本研究拟采用生物信息学技术及pull-down技术对其吸附的miRNA进一步鉴定；探究沉默或过表达LINC00160对软骨细胞增殖、凋亡、细胞外基质成分的影响及其IL6/Stat3通路调控变化；构建小鼠OA模型，观察LINC00160沉默对OA发生、发展的影响，为OA防治提供新的思路。

骨性关节炎是中老年人群中常见的一种慢性退行性骨关节疾病，临床症状以关节的持续性疼痛、肿胀畸形及活动受限为主，严重影响中老年人群的生活质量。非编码RNA（miRNA、LncRNA）在骨性关节炎发病机制中扮演重要的角色。本项目采用qRT-PCR技术，对前期研究中LncRNA芯片筛选出来的表达差异的LncRNA进一步扩大样本量验证，证实了低表达的miR-149-5p可以使IL6/Stat3信号通路异常激活，进而引起软骨细胞凋亡；同时，我们完成了体外实验部分，探讨sh-LINC00160，AAV-LINC00160，miR-149-5p mimics，miR-149-5p inhibitor及各自的阴性对照对软骨细胞增殖、凋亡及对IL6/Stat3信号通路的影响，证实了高表达的LINC00160可以作为miR-149-5p的ceRNA，调控IL6/Stat3信号通路对软骨细胞凋亡和软骨退变过程的影响；利用OA小鼠模型，体内实验验证了沉默LINC00160能够延缓OA软骨退变的进程。我们的研究，有助于进一步揭示OA的病理机制，为研发针对此信号通路的特异性药物提供理论基础。.项目还通过一系列临床研究的方法，围绕髋膝关节置换围手术期快速康复等热点问题进行研究，已发表SCI收录论文13篇，中文核心期刊论文8篇，并在国内外学术会议上获得了交流，促成了本项目获得经验的推广。项目获得授权实用新型专利2项，并获得了2019年、2020年徐州市医学新技术引进奖二等奖各1项，2022年徐州市医学新技术引进奖一等奖1项。在本项目基础上，延伸研究，获得了2022年国家自然科学基金面上项目的资助（编号82272523），将继续围绕OA发生发展的表观遗传学机制进一步深入探究。