原发瘤切除触发Dll4/Notch通路对转移瘤的影响及当归补血汤对其的作用

Surgical removal of the primary tumor provides the best chance of long-term disease-free survival for patients. Unfortunately, clinical and experimental research found that surgery is a double-edged sword, resection of the primary tumor also can trigger tumor angiogenesis switch, which promotes rapid growth of "dormant" metastasis. Surgery lead to deficiency of both Qi and Blood, tonify Qi and Blood is a common therapeutic method. Tonifying qi and blood will contribute to postoperative rehabilitation of the cancer patients, and whether it can inhibit metastasis growth? In our prophase research, we have found that the method of tonify Qi and Blood could control the growth of postoperative metastasis in animal models. on this basis, we will establish xenografts and liver metastases model of human colon cancer, study the effect of Danggui Buxue Decoction in different modes on metastasis growth after primary tumor resection with whole-body fluorescent imaging technology etc; Then we research the impact of Danggui Buxue Decoction on tumor cytokinetics, tumor angiogenesis and Dll4/Notch pathway with MTT assay, Transwell, chick embryo chorioallantoic membrane(CAM),cell co culture method, Western blot etc, and reveal the mechanism of Danggui Buxue Decoction inhibit the metastatic tumors growth after surgery and improve the effect of using tonify Qi and Blood during the perioperative period.

手术是治疗恶性肿瘤主要方法，但临床和实验研究发现手术是一把双刃剑，切除原发瘤的同时可触发肿瘤血管生成开关，使“休眠”的转移瘤快速生长。手术耗伤气血，益气补血是常用治法。益气补血促进患者术后康复的同时，是否能抑制转移灶生长？前期研究发现：益气补血法可抑制动物模型术后转移瘤的生长。本项目在此基础上，重点利用结肠癌皮下、肝脏转移瘤模型，采用活体荧光成像等技术，研究当归补血汤不同给药模式对原发瘤切除后转移瘤生长的影响；采用MTT、Transwell小室法、鸡胚尿囊膜、细胞共培养、Western blot等技术，研究当归补血汤对肿瘤细胞生长动力学、肿瘤血管生成，以及Dll4/Notch通路的影响，揭示当归补血汤抑制术后转移瘤生长的内在机制，为恶性肿瘤围手术期运用益气补血法，进一步提高疗效奠定理论基础。

目的：探究当归补血汤对Balb/c小鼠结肠癌原发瘤切除后转移瘤的影响及其机制。方法：网络药理学预测当归补血汤抗转移性结肠癌潜在靶点及机制，构建Balb/c小鼠结肠癌皮下转移瘤模型，随机分为原发瘤切除组（R）、原发瘤不切除组（NR）、术前组（DBD I，当归补血汤）、术后组（DBD II，当归补血汤），连续灌胃给药14天。Western blot检测转移瘤凋亡相关蛋白表达水平，确定最佳给药模式；观察R组、NR组、黄芪组（HQ）、当归组（DG）、当归补血汤组（DBD）对转移瘤生长速度及瘤重、对肿瘤切除后转移瘤细胞动力学、血管生成促进因子/抑制因子的影响。结果：1、与R比较，NR，DBD II转移瘤重降低（p<0.001），DBDII转移瘤重显著降低（p<0.0001）；2、与R比较，NR，DBD II蛋白Bax, Caspase3表达上调（p<0.05），DBDII表达明显上调（p<0.01）；与R组比较，DBD II 蛋白Cleaved-caspse3表达上调（p<0.01）,NR 蛋白Cleaved-caspse3表达上调但与R比差异无统计学意义；3、与R比较，NR，HQ，DG，DBD均可抑制转移瘤生长，抑瘤率分别为24.72%，33.98%，43.89%，52.66%，与R比较，NR,HQ，DG转移瘤重降低（p<0.05），DBD转移瘤重明显降低（p<0.001）；与R比较，NR，HQ，DG蛋白Bax, Caspase3， Cleaved-caspase3，AS，ES表达均上调（p<0.01），DBD表达明显上调(P<0.001)，与R比较，NR，HQ，DG蛋白Bcl2，PDGFC，VEGFA，bFGF，Dll4表达下调(P <0.05)，DBD表达明显下调(P<0.001)；4、与R比较，NR，DG，HQ,蛋白Ki67, Brdu，CD34阳性表达均减少（p<0.01）,DBD阳性表达明显下降（P<0.001）,与R比较，NR，DG，HQ，Tunel阳性表达均上调（p<0.01），DBD阳性表达明显上调（P<0.001）。结论：当归补血汤及组方单味药黄芪，当归均可抑制结肠癌皮下转移瘤生长，复方具有明显协同增效作用，其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成相关。