基于TLR4-NF-κB介导的炎症反应的解毒活血法抗血管再狭窄作用的研究

Nowadays, Restenosis ( RS) remains the principal clinic problem that restricts the development of percutaneous coronary intervention ( PCI）treatment. Inflammation mechanism is one of the major core mechanisms in the formation of SR, and it plays an important role in intima hyperplasia and the process of restenosis. We argue that “toxicity and stagnation interties inside artery ” is the key pathogenesis that may cause RS after PCI treatment and correspondently attempt to put the detoxification and activating blood circulation therapy which can be used to inhibit inflammation and intervene the formation of the restenosis into clinical practice. Thus, we put forward the following hypothesis: the pathogenesis of “toxicity and stagnation interties inside artery ” that causes RS after PCI has a close relationship with the partial inflammation after the intima damage; the detoxification and activating blood circulation therapy can be used to prevent the occurrence and development of RS by repressing inflammation. This project aims to start with the problem of how to intervene the inflammatory reaction, to study the function of the detoxification and activating blood circulation therapy to resist restenosis and to research the mechanism of inhibiting inflammation to intervene the formation of the restenosis by regulating the signal transduction pathways of TLR4-NF-κB.This study will reveal the effectiveness and scientificity of the traditional Chinese medicine in preventing and treating restenosis by detoxification and activating blood circulation therapy , offering a new idea in RS prevention and treatment by TCM and playing its part of guiding function in clinic applications.

血管再狭窄(RS)是当前制约经皮冠状动脉介入（PCI）发展的一个突出临床问题。炎症机制是RS形成的主要核心机制之一，在内膜增生及RS过程中起重要作用。我们认为，PCI后RS的主要病机是毒瘀互结，并针对这一病机在临床运用解毒活血法可通过抑制炎症反应改善PCI后血管再狭窄。因而，我们提出以下假说：PCI后血管再狭窄毒瘀互结病机，与血管内膜损伤后局部炎症反应密切相关，解毒活血法可通过抑制炎症反应阻抑血管再狭窄的发生发展。本项目拟从干预炎症反应入手，研究解毒活血法抗血管再狭窄的作用，并从TLR4-NF-κB信号转导通路研究其干预炎症抑制血管内膜增生的作用机制，从而揭示中医解毒活血法防治血管内膜增生的有效性和科学性，为中医药防治RS提供新思路，对临床应用具有指导作用。

背景：经皮冠状动脉介入治疗是解决冠心病血运重建的主要手段，但支架植入后血管再狭窄的发生率高。炎症反应导致内膜增生形成再狭窄，与中医“毒瘀互结”病机相关，而解毒活血法可以抑制炎症反应阻抑血管再狭窄。内容：本项目使用球囊损伤SD大鼠胸主动脉，从而建立与支架再狭窄病理特征类似的SD大鼠模型，对大鼠胸主动脉进行炎症因子及蛋白检测。另一方面，通过贴块法培育大鼠胸主动脉VSMC，使用含药血浆培养后进行检测。由此评估解毒活血法抑制炎症反应及血管平滑肌细胞增殖的疗效，并探究作用机制。结果及数据分析：在术后14d、28d，假手术组血管内膜均完整，模型组的血管形态都发生增生性改变，说明动物造模成功。给药14d、28d后在动物体内研究发现，与假手术组相比，其他组血液中的炎症因子IL-1、TNF-a、ICAM-1、MCP-1均升高，但阿司匹林组与解毒活血方高中低剂量组的均比模型组低。同样，在大鼠血管组织中炎症因子IL-1、TNF-a、ICAM-1、MCP-1的蛋白表达也出现了变化，结果与血液的炎症检测一致。不过解毒活血方低剂量组中IL-1、TNF-a、ICAM-1、MCP-1的含量高于阿司匹林组，中高剂量组的蛋白表达与阿司匹林组相当。通过课题组前期研究，我们认为TLR4-NF-κB这一信号通路介导了炎症反应与VSMC的增殖，在血管组织的蛋白检测中，与假手术组相比，其他各组的TLR4、NF-κB p65的蛋白表达升高，其中模型组升高最明显，而IκBa蛋白表达均下降。我们运用PCNA、cyclinD1、cyclinE评估VSMC的增殖状况，结果发现，与假手术组相比，其余各组血管组织中PCNA、cyclinD1、cyclinE的蛋白表达升高，解毒活血方低中高剂量组/阿司匹林组与模型组相比，PCNA、cyclinD1、cyclinE的蛋白表达降低。在细胞实验方面，结果显示LPS诱导组可明显促进VSMC的增殖，与空白对照组比较有显著性差异；与空白血清组比较，解毒活血方血清组的细胞增殖活性显著降低；与阿司匹林血清组比较，解毒活血方血清组细胞增殖活性显著降低。科研意义炎症反应是PCI术后的核心机制，可以促使VSMC增殖，导致血管再狭窄，解毒活血方可以抑制炎症物质的产生，也可以抑制血管组织中蛋白的表达，最终达到拮抗血管内膜增生的作用。从而揭示解毒活血法防治血管内膜增生的有效性，为中医药防治RS提供依据。