益气扶正法协同IFN-α抑制肝癌术后复发转移的探索研究

IFN-a是临床上预防肝癌术后复发、转移的常规药物,但长期大剂量应用IFN-a所诱发的耐药性限制了其临床应用。我们研究发现益气扶正法的代表药物参芪扶正注射液可有效抑制肝癌的生长转移，并证实其可显著增强肝癌组织内STAT1表达，鉴于STAT1的高表达是降低IFN-a耐药性的关键，我们推测参芪扶正注射液可有效减少肝癌对IFN-a的耐药性。本研究通过建立具有肺转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97L及其裸鼠肝癌模型，采用MTT、Transwell、ELISA、荧光定量PCR、Western Blot、免疫组化、寡核苷酸芯片及RNA干扰等技术，从体内和体外两个层面系统研究参芪扶正注射液协同IFN-a抑制肝癌生长转移及复发的作用，揭示参芪扶正注射液对JAK/STAT 信号通路的影响，阐明参芪扶正注射液降低IFN-a耐药性的机制，为临床联合使用参芪扶正注射液和IFN-a防治肝癌术后复发转移提供理论依据。

IFN-a是临床上预防肝癌术后复发、转移的常规药物,但长期大剂量应用IFN-a所诱发的耐药性限制了其临床应用。我们研究发现益气扶正法的代表药物参芪扶正注射液可有效抑制肝癌的生长转移，并证实其可显著增强肝癌组织内STAT1表达，鉴于STAT1的高表达是降低IFN-a耐药性的关键，我们推测参芪扶正注射液可有效减少肝癌对IFN-a的耐药性，提高IFN-a的疗效。本研究通过建立具有肺转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97L及其裸鼠肝癌模型，采用MTT、Transwell、荧光定量PCR、Western Blot、寡核苷酸芯片及RNA干扰等技术，从体内和体外两个层面系统研究参芪扶正注射液协同IFN-a抑制肝癌生长、转移的作用，揭示参芪扶正注射液对JAK/STAT 信号通路的影响。研究发现：（1）在体外环境下，小剂量参芪扶正注射液可增强干扰素α对人肝癌MHCC97L瘤株增殖及侵袭能力的抑制作用；（2）参芪扶正注射液与干扰素α联合应用与单独应用干扰素α比较可显著上调人肝癌细胞株MHCC97L中STAT1基因表达，并下调VEGF基因表达；（3）参芪扶正注射液及IFN-α联合使用较单独使用干扰素α可显著抑制裸鼠肝癌生长及肺部转移；（4）参芪扶正注射液可对JAK/STAT信号通路中基因产生广泛影响；另外，研究组还首次构建成功针对人肝癌细胞MHCC97L的VEGF 及STAT1基因“沉默”的细胞株，为今后从体内、体外层面系统研究相应基因沉默与药物作用的相关性提供重要的技术平台，并在此基础上研究发现：VGEF及STAT1基因“沉默”后，参芪扶正注射液联合干扰素α对人肝癌细胞MHCC97L及裸鼠肝癌的抑制作用减弱。上述结果初步证实：参芪扶正注射液可通过影响JAK/STAT信号通路，上调STAT1的表达，下调VEGF的表达，减少IFN-α耐药性以增强IFN-α对肝癌的治疗效果，该发现为临床联合使用参芪扶正注射液和IFN-a防治肝癌术后复发转移提供理论依据。同时，研究也证实了项目负责人提出的从“祛邪”的分子效应通路入手研究“扶正”作用机理思路的可行性，为恶性肿瘤的“扶正祛邪法”研究开辟新途径。