从肠道菌群/miRNA-BDNF介导的突触可塑性解析温胆汤对广泛性焦虑症的调节机制

Generalized anxiety disorder, characterized by consist anxiety and fear, is a big burden of the patient, family and the society. In the previous study, the formula preparation and evaluation of WENDAN TANG(WDT) is established, and the effect on stress, insomnia and posttraumatic stress disorder, mediated by synaptic plasticity, is confirmed. By literature research, the relation of WDT to gut microbiota is analyzed, and in the anxiety model induced by stress, the effect of WDT on gut microbiota is detected. According to the above, in the study, human floraassociated model will be adopted to mimic generalized anxiety disorder, the mice will be treated with WDT or probiotics starting at day1, day7 or day14 post-colonization. Altered BDNF expression is a hallmark of disturbed microbiota-gut-brain axis, the gut microbiota, miRNA aiming at BDNF, BDNF and its related the synaptic plasticity in amygdala, prefrontal cortex and hippocampus will be examined to elucidate the mechanism of WDT to GAD. By miR-mimics and miR-inhibitor in vitro, the targeting site of WDT will be verified as well. And further the relation of gut microbiota to synaptic plasticity may be the biological basis that WDT treats the mental illness by regulating “Chinese gallbladder and stomach”.

广泛性焦虑症(generalized anxiety disorder, GAD)以持续存在的紧张、忧虑与恐惧为特点，是焦虑症中最常见的一类，对患者、家庭乃至社会影响严重。团队前期进行了温胆汤抗失眠—应激的系列研究，优化其制备工艺，并进行质控，明确了其对突触可塑性的调节作用，通过文献挖掘了温胆汤与肠道菌群的关系，小样本验证了其对应激致焦虑模型中肠道菌群的调节。基于此，本研究拟选用更能反映临床的人源肠道菌群动物GAD模型，以“肠道菌群—情绪中枢突触可塑性”为探索思路，选择联系二者的最新发现miRNA-BDNF环节，体内外实验并用，结合肠道菌群和miRNA高通量测序、miRNA过表达与干扰等先进技术，阐释温胆汤的调节作用，明确其作用靶点，从“菌-肠-脑轴”解析其“利胆胃以调情志”的生物学基础。该研究为温胆汤的推广提供依据，为情志病现代机制的解析拓展思路。

广泛性焦虑症以持续存在的紧张、忧虑与恐惧为特点，是焦虑症中最常见的一类，对患者、家庭乃至社会影响严重。团队以“肠道菌群—情绪中枢突触可塑性”为探索思路，进行了文献研究、方剂分析、动物实验与体外细胞实验四个部分的研究：一，文献研究中，基于现代文献研究广泛性焦虑障碍的证候分布特点与用药规律；二，对温胆汤的网络药理学分析与成分鉴定；三，动物实验采用双模型（慢性束缚应激模型与人源菌群模型），分别从一般状态——行为学——肠道菌群测序——电镜——miRNA高通量测序——分子生物学验证等多层次、多角度相结合，分析温胆汤的调节通路。四，体外实验，分别采用炎症模型与皮质酮焦虑细胞模型，进一步从细胞层面验证上述实验中温胆汤的调节通路。结果显示：（1）对于本病，单一证素病性因素中最常见的是气滞，频率为56.92%。在病位证素和病性证素的组成中“气滞+痰”的作用病位主要为胆。使用前3 位的方剂分别为温胆汤（21 次，14.19%）、归脾汤（11 次，7.43%）、柴胡疏肝散（11 次，7.43%）。（2）在温胆汤的演变过程中，其药物组成的改变及加减化裁是其主治病证变化的关键，从而从文献研究确认了对于本研究选择陈无择《三因方》中温胆汤的方证相应性。（4）温胆汤共有137个主要活性成分，可作用于938个靶点；广泛性焦虑症与4794个靶点相关；其中，569个靶点是温胆汤与广泛性焦虑症的交集靶点。（3）温胆汤能够改善两种模型中小鼠的焦虑行为，主要能使肠道菌群中有益菌显著增加，发挥抗焦虑作用。温胆汤对情绪中枢的前突触可塑性有显著的改善作用，主要在于两个方面，一，调节前额叶皮质的谷氨酸能神经通路，通过mmu-miR-146b-5p、mmu-miR-1a-3p、mmu-miR-382-3p、mmu-miR-218-5p等miRNA发挥具体作用；二，通过减轻外周和中枢系统的炎性反应发挥作用，主要通过作用于PI3K/AKT信号通路和MAPK信号通路。在细胞实验中对此也进行了确证。本研究从“菌-肠-脑轴”解析其“利胆胃以调情志”的生物学基础，为温胆汤的推广提供依据，为情志病现代机制的解析拓展思路。