人胚眼发育中血视网膜外屏障的形成与功能研究

研究人胚眼发育过程中，血视网膜外屏障形成及其功能评价，即RPE细胞间的紧密连接(TJs)构建与功能，对视网膜疾病认识与视网膜移植研究有着广泛的意义。我们选用不同发育时期的外伤引产的人胚眼，进行体外分离培养RPE细胞，再将细胞分别培养到Transwell滤膜上，使细胞形成类似于体内的单层色素上皮层，模拟体内神经视网膜及脉络膜活化的信号协同调节途径，选用不同成分的顶房和底房条件培养基，来观察RPE细胞间紧密连接复合体的形成与功能。用RT-PCR、western blot、 免疫组化结合光电镜、共聚焦显微镜来观察RPE细胞间紧密连接结构及紧密连接跨膜蛋白Occludin、Claudins和骨架蛋白ZO-1和ZO-2在mRNA和蛋白水平的表达。通过测定经此色素上皮细胞间电阻（TER）和透过此屏障的物质通透性来评价此血视网膜外屏障的功能。并进一步探讨神经视网膜和脉络膜通路对屏障功能的影响。