应用染色质免疫沉淀技术（ChIP）研究WSSV病毒对宿主基因表达的调控

对虾白斑综合症病毒WSSV是对虾养殖中最具破坏性的病害，给水产养殖造成了巨大的经济损失。了解WSSV的侵染机制将极大的促进对该病害的防治，但目前对这方面的研究还十分有限。病毒作为一种细胞内寄生生物，其复制增殖完全要依赖于宿主的资源，因此病毒如何调控宿主基因的表达，俘获宿主来为其服务就起着非常关键的作用。染色质免疫沉淀技术是目前研究体内DNA和蛋白质相互作用的最好方法，近年来被广泛用于体内转录调控因子与靶基因特异性核苷酸序列结合的研究中。本项目将把目前已筛选到的WSSV相关基因作为突破口，结合生物信息学分析，选择其中1-2个带有重要基序（Motif）的转录调控因子为研究对象，应用染色质免疫沉淀技术分别在核酸与蛋白水平上对其与宿主的作用进行研究，了解其如何通过与靶基因的相互作用，调控靶基因的表达，从而促进病毒的增殖。本研究将有利于揭示病毒感染与流行的分子机理，为WSSV的防治提供有效的途径。

对虾白斑综合症病毒（WSSV）是对虾养殖中最具破坏性的病害，给水产养殖造成了巨大的经济损失。了解WSSV的侵染机制将极大的促进对该病害的防治。本项目以具有转录因子特征的WSSV极早期基因WSV069为主要研究对象，对其对基因表达的调控机制进行研究。首先通过对染色质免疫共沉淀实验方法的优化，建立了适合对虾组织的染色质免疫共沉淀方法。运用该方法，我们富集得到与WSV069相互作用的DNA靶序列。进一步结合Solexa高通量测序与生物信息学分析，获得了大量的WSV069潜在的基因调控序列。另一方面，根据WSV069可自激活的特点，运用免疫共沉淀方法我们鉴定获得了与WSV069相互作用的对虾信号传导及转录激活因子（STAT），并通过进一步的研究证实WSV069可通过与STAT的相互作用间接调控WSV051的启动子。此外，通过研究我们还发现WSSV的另外一个极早期基因WSV083含有一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域，WSV083可通过该结构域抑制对虾粘着斑激酶（FAK）分子的磷酸化。通过对对虾FAK的RNA干扰试验表明，WSV083通过抑制对虾FAK的磷酸化活性，从而调控宿主对病毒感染的免疫应答。本项目的研究将有助于促进对WSSV感染的分子机制的认识，为WSSV的病毒防治提供依据。