GATA3特异性下调LINC00578抑制肾透明细胞癌侵袭转移及其调控机制

Metastasis is a major cause of death among clear cell renal carcinoma (ccRCC) patients，but the mechanism is still unclear. Our previous studies have shown that the expression level of GATA3 was significantly lower in ccRCC tumor tissues compared with adjacent non-tumor tissues. Higher GATA3 expression was associated with increased overall survival, which strongly suggest that GATA3 may inhibit metastasis of renal cell carcinoma. Further study of GATA3 gene sequence found that it binds to the promoter region of LINC00578. We presume that GATA3 may regulate ccRCC metastasis through down-regulation expression of LINC00578. Through experimental methods such as lentivirus stabilization, qRT-PCR, Matrigel invasion, wound-healing and in vivo assay, we will further explore the impact of GATA3 on tumor migration and invasion including the possible molecular mechanism in which GATA3 inhibits RCC metastasis by regulating LINC00578. This project will benefit improving our knowledge in understanding the mechanism of RCC metastasis and providing useful clues and possible therapeutic targets for clinical diagnosis and treatment of the disease.

转移是肾透明细胞癌患者死亡的主要原因，而肾癌发生转移的机制仍不清楚。我们前期的研究发现，GATA3在肾透明细胞癌组织中的表达下调，与预后具有明显相关性，强烈提示GATA3可能抑制肾透明细胞癌的转移。进一步研究GATA3基因序列，发现其与LINC00578启动子区结合，并下调LINC00578的表达。我们推测GATA3可以通过下调LINC00578调控ccRCC的侵袭转移。本项目拟用qRT-PCR方法检测GATA3及其调控基因LINC00578在肾癌临床诊治中的意义，使用慢病毒稳转、粘附实验、侵袭小室、动物实验等观察GATA3下调LINC00578对肾癌侵袭转移的影响及其调控机制，为肾癌转移的分子机制研究提供新的线索，为临床肾癌的诊治提供新的思路与靶点。

肾透明细胞癌是临床常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤之一，其发生发展的机制尚未清楚。我们的研究发现LINC00578在肾透明细胞癌组织及细胞中高表达；通过CCK8、克隆实验、划痕实验、transwell实验研究发现，在786-O和ACHN两株细胞中，沉默LINC00578可以显著减弱肾癌细胞的增殖和迁移能力；而过表达LINC00578，对肾癌的增殖、迁移能力没有显著影响。体内裸鼠成瘤实验进一步验证沉默LINC00578可以抑制肾癌的增殖能力。GATA3可以直接结合并抑制LINC00578基因的启动子活性，该结果通过荧光素酶试验和CHIP实验加以验证；RT-PCR实验更进一步证实GATA3过表达可以显著抑制LINC00578的表达；而同时过表达GATA3和LINC00578后，786-O和ACHN细胞中LINC00578的表达量显著提高。为了进一步研究GATA3特异性结合LINC00578对肾透明细胞癌生物学行为的影响，在肾癌细胞786-0、ACHN中构建GATA3过表达（Lv-GATA3）、LINC00578过表达（Lv- LINC00578）、GATA3过表达+ LINC00578过表达（Lv-GATA3+Lv-LINC00578）稳系细胞株，运用CCK8、克隆实验、划痕实验、transwell实验研究发现：GATA3过表达显著抑制肾癌细胞增殖、迁移水平，LINC00578过表达对肾癌细胞增殖水平无影响，但可以显著取消GATA3对肾癌细胞增殖、迁移的抑制作用。动物实验结果也表明过表达LINC00578可以显著取消GATA3过表达对肾癌细胞裸鼠体内成瘤的抑制作用。但是，GATA3通过下调LINC00578抑制ccRCC增殖、转移的调控机制目前尚在研究中。此研究为ccRCC增殖转移的研究提供新的线索，并为临床肾癌的诊治提供新的思路与靶点。