SAP97对Müllerr细胞上AQP4和Kir4.1分布的影响研究

Retinal edema especially those in macular could result in severe visual loss and the resolutoin of retial edema is an important task for ophthalmologists. Whereas the precise mechanism of retinal edema is unknown and it is hard to resolve this problem.Recent studies revealed that member of membrane-associated guanylate kinase (MAGUK) proteins---SAP97 is a major determinant of the organization of ion channels in the plasma membrane in various cell types. And our previous study revealed that upregulation of SAP97 coincided with the redistribution of AQP4 and Kir4.1 in blue light-injured rat retina, suggesting that SAP97 played a major role in the recruitment of such channels in light-induced outer retinal edema.So we design this research, hoping understand the relationship between these three proteins through a series of experiments including coimmuprecipitation and co-transfection of these proteins to Müller cells. And we would detect degrees of phosphorylation of SAP97 and its impact on the distribution of Kir4.1 and AQP4 in order to understand the precise mechanism of relocation of these two channels.

视网膜水肿尤其是黄斑部的水肿可引起严重的视力丧失，是目前眼科临床工作的重点及治疗难点。目前对引起视网膜水肿的确切分子机制并不明确，因此也无法从根本上实现"对因治疗"。最近的研究表明，SAP97是膜相关鸟甘酸激酶家族的重要一员，参与了多种离子通道在各种细胞上的表达及分布。而我们既往的研究发现在光损伤大鼠视网膜中存在外层视网膜水肿，而SAP97在该视网膜上的表达变化与Kir4.1、AQP4一致，因此我们推测SAP97可能在该两个通道的再分布中发挥着重要作用。为了验证这一推测，我们设计了本项研究，希望通过该三个蛋白在Müller上的共转染及免疫共沉淀等研究三个蛋白之间的相互关系，并通过磷酸化分析等明确SAP97磷酸化程度的不同对Kir4.1通道的电活动及AQP4通道分布的影响，旨在明确Kir4.1及AQP4在大鼠Müller细胞上分布改变的确切分子机制。

视网膜水肿尤其是黄斑部的水肿可引起严重的视力丧失，是目前眼科临床工作的重点及治疗难点。目前对引起视网膜水肿的确切分子机制并不明确，因此也无法从根本上实现“对因治疗”。最近的研究表明，SAP97是膜相关鸟甘酸激酶家族的重要一员，参与了多种离子通道在各种细胞上的表达及分布。而我们既往的研究发现在光损伤大鼠视网膜中存在外层视网膜水肿，而SAP97在该视网膜上的表达变化与Kir4.1、AQP4一致，因此我们推测SAP97可能在该两个通道的再分布中发挥着重要作用。为了验证这一推测，我们设计了本项研究，希望通过该三个蛋白在Müller上的共转染及免疫共沉淀等研究三个蛋白之间的相互关系。以大鼠视网膜细胞中分离出来的原代Müller细胞作为主要研究对象，通过免疫组化及免疫共沉淀等方法证实SAP97与Kir4.1、AQP4存在相互作用。