放射治疗诱导肝癌细胞上皮-间质转化及分子机制研究

肝癌是我国常见的恶性肿瘤。放射治疗在肝癌治疗中占有重要的地位。其在治疗过程中，可促进残存癌细胞的侵袭和转移，但机制尚未明确。上皮-间质转化（Epithelial.-Mesenchymal Transition, EMT）是肿瘤转移的关键事件，尤其是肝癌的转移与EMT密切相关。课题组从放疗后行肝癌切除的癌组织中观察到肝癌细胞的EMT；同时，用一定剂量射线处理肝癌细胞株后，也可诱导肝癌细胞梭形变（EMT的形态学变化）。由此推测放射治疗可以诱导肝癌细胞发生EMT，促进肝癌的侵袭和转移。本课题从细胞及动物实验水平，检测肝癌细胞经放射处理后的形态学变化、EMT的分子标记、功能检测（侵袭和迁移）、调控蛋白、信号通路的表达及相应通路抑制剂预处理后放疗对肝癌细胞EMT的影响，来阐明放疗诱导肝癌细胞EMT的作用及分子机制，以期通过抑制EMT来减小放疗引起的肿瘤转移风险，为增强放疗疗效提供理论及实践依据。

肝癌是我国常见的恶性肿瘤，放射治疗在肝癌治疗中占有重要的地位，其在治疗过程中，可促进残存癌细胞的侵袭和转移，但机制尚未明确。上皮-间质转化是肿瘤转移的关键事件，尤其是肝癌的转移与EMT密切相关。课题组从放疗后行肝癌切除术之中观察到肝癌细胞的EMT，且EMT相关蛋白E-cadherin及vimentin在放疗后呈梭形样变的细胞株中表达显著下降。上皮细胞标志物E-cadherin在乏氧状态下与正常含氧量的环境相比表达明显下调。但经过热疗预处理后此表达变化明显减弱。vimentin表达与之相反。乏氧状态下，细胞侵袭性明显加强，而热疗可显著抑制细胞的侵袭。而单纯给予热疗组细胞侵袭性明显低于对照组。课题组实验证明大鼠肝癌组织以及肝癌细胞株HepG-2、Bel-7402中5-LOX蛋白高表达，RT-PCR检测肝癌组织以及肝癌细胞株5-LOX mRNA的表达阳性。其阳性表达率与正常组织相比，具显著性差异。分别给予5-LOX特异性抑制剂齐留通（zileuton），动物肝癌发生率及癌结节数明显减少，肝细胞异型性亦减少。细胞存活率呈剂量依赖性下降，细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。大鼠肝癌组织以及肝癌细胞株HepG-2、SMMC772中1 2-LOX蛋白高表达于肝癌细胞浆，给予12-LOX特异性抑制剂黄芩黄素（baicalein）后，表达明显下降。细胞存活率呈剂量依赖性下降，流式细胞术检测可见细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。抗凋亡蛋白Bcl-2表达呈剂量依赖性下降，促凋亡蛋白Bax呈剂量依赖性上升，磷酸化ERK1/2呈剂量依赖性下降。1 2-LOX的代谢产物1 2-HETE可以逆转黄芩黄素的影响。.