水稻齿叶矮缩病毒运动蛋白及其功能域鉴定

水稻齿叶矮缩病毒（RRSV）引起的齿叶矮缩病近年在福建等省大面积暴发，系经褐飞虱专化性持久传播，其基因组由10个片段的双链RNA组成，基因组采取负义编码策略。长期以来由于缺乏相应的研究手段及体系，迄今还没有任何直接的生物学证据证明某一编码蛋白的具体功能。针对这一问题，本项目拟借助近年发展起来的TMV操作系统，以运动缺陷型（movement-deficient）TMV载体为核心，通过构建缺陷型TMV-RRSV基因杂合体克隆，体外反转录制备侵染性病毒RNA，结合本氏烟、珊西烟、枯斑珊西烟、转TMV-MP本氏烟、转TMV-MP珊西烟和转TMV-MP枯斑珊西烟等寄主，鉴定病毒的运动相关蛋白基因，再构建系列突变体，确定与病毒运动相关的功能域，揭示RRSV在细胞间移动和植物体内长距离运输的分子机制，具有重要的理论价值。

本项目围绕引起水稻齿叶矮缩病的水稻齿叶矮缩病毒展开系统研究。在对水稻齿叶矮缩病在我国南方和越南稻区的发病情况进行调研的基础上，同时测定了3个中国RRSV代表分离物的全基因组序列，系统发育树分析表明我国RRSV分离与与泰国的亲缘关系最近，并可能与细菌的基因发生基因的水平转移。另外，借助烟草花叶病毒（TMV）的运动蛋白鉴定系统，确定RRSV的Pns6蛋白为运动蛋白，并通过本氏烟16c系统，鉴定出Pns6蛋白也是RNA沉默抑制子。Pns6具有多种功能，在RRSV运动和致病过程中扮演重要作用；并结合细胞生物学研究RRSV在其介体褐飞虱体内的侵染循回及Pns10为RRSV复制原质的组分之一。本项目的研究为最终揭示RRSV 植物寄主细胞间运动及其介体体内循回增殖的分子机制奠定基础，并具有重要的理论价值。