瞬时感受器电位M7参与肥大细胞抗原活化及哮喘发病的研究

肥大细胞的抗原活化在哮喘发病中起重要作用。以往研究认为，晚期胞外钙离子内流造成的持续的胞内钙离子浓度升高是肥大细胞抗原活化的基础。但是，究竟哪些离子通道介导了钙离子内流目前尚不清楚。我们前期在RBL-2H3细胞系中发现：瞬时感受器电位M7通道（TRPM7）介导了RBL-2H3细胞抗原活化晚期钙离子内流，也参与RBL-2H3细胞抗原活化后的脱颗粒反应。那么，TRPM7是否介导了肥大细胞抗原活化晚期钙离子内流呢？本项目拟进一步采用原代肥大细胞培养以及整体动物模型相结合的方法，应用TRP通道阻滞剂和逆转录病毒介导的RNA干扰等技术，观察TRPM7通道在原代肥大细胞抗原活化以及大鼠支气管哮喘模型气道炎症反应的作用，旨在获得TRPM7参与支气管哮喘发病机制的证据，为确立TRPM7作为哮喘治疗的新靶点提供科学依据。

支气管哮喘（以下简称哮喘）是一种由多种因素引起的，以可逆性气道阻塞、气道高反应性和气道炎症为特征的变态反应性疾病。肥大细胞的抗原活化和脱颗粒在哮喘发病中起重要作用。我们前期在RBL-2H3细胞系中发现：瞬时感受器电位M7通道（TRPM7）介导了RBL-2H3细胞抗原活化晚期钙离子内流，也参与RBL-2H3细胞抗原活化后的脱颗粒反应。那么，TRPM7是否介导了肥大细胞抗原活化晚期钙离子内流呢？本研究进一步采用原代肥大细胞培养以及整体动物模型相结合的方法，应用TRP通道阻滞剂和逆转录病毒介导的RNA干扰等技术，观察TRPM7通道在原代肥大细胞抗原活化以及大鼠支气管哮喘模型气道炎症反应的作用，旨在获得TRPM7参与支气管哮喘发病机制的证据。本研究的主要研究内容与结果摘要如下：.一、构建哮喘SD大鼠模型并成功培养正常SD大鼠及哮喘SD大鼠骨髓来源肥大细胞(BMMC)，研究结果发现哮喘大鼠BMMC的TRPM7的表达高于正常大鼠BMMC；TRP通道阻断剂2-氨基乙基联苯基硼酸酯（2-APB）抑制大鼠BMMC抗原活化和分泌功能，其抑制作用在哮喘大鼠BMMC更显著。.二、构建大鼠TRPM7-shRNA慢病毒载体，转染大鼠TRPM7-shRNA慢病毒载体至正常大鼠及哮喘大鼠BMMC。结果发现：正常大鼠BMMC及哮喘大鼠BMMC在转染大鼠TRPM7-shRNA慢病毒载体后TRPM7表达下降，进一步检测发现转染大鼠TRPM7-shRNA慢病毒载体后正常及哮喘大鼠BMMC抗原活化及分泌功能较转染前受到明显抑制。.三、动物实验：建立SD哮喘大鼠模型，经气管注射入TRPM7-shRNA慢病毒载体，观察其对大鼠肺组织TRPM7表达、大鼠肺组织气道炎症反应、肥大细胞脱颗粒、支气管肺泡灌洗液细胞因子浓度的影响。研究结果发现TRPM7-shRNA慢病毒载体在体内实验中有效下调TRPM7表达、抑制气道炎症反应和肥大细胞浸润、减少组胺、IL-6、IL-13、TNF-α的释放。.本研究证实TRPM7通道表达于大鼠BMMC并参与肥大细胞抗原活化和分泌功能，其效应在哮喘状态更显著；抑制TRPM7的表达可抑制肥大细胞的抗原活化及后续的炎症反应。基于上述研究结果，我们认为TRPM7参与肥大细胞的抗原活化和脱颗粒反应，在哮喘发病中起重要作用。本研究为TRPM7作为哮喘治疗新靶点提供了理论依据。