人类Sp1结合启动子序列特异性的非随机锌指蛋白库的建立

锌指蛋白（ZFP）是大部分转录因子与DNA序列特异性结合的肽链。众多的研究表明，人工ZFP也能够与DNA序列特异性结合。以这种人工ZFP构建的转录活化或抑制因子能有效激活或抑制目的基因表达，已经成为临床治疗用药，国内尚未见类似的研究。为了构建特异性激活甲基化失活的p16基因的人工转录因子，我们在前期工作中已经构建了15种二锌指的基本元件，组合出了五十四种以p16启动子中Sp1识别位点为核心结合序列的侯选七锌指结合蛋白，为构建更大的锌指文库积累了经验。本研究拟为人类基因组中各种含Sp1结合序列的启动子构建较完整的人工非随机ZFP库，同时建立以目的DNA结合序列为探针的ZFP-DNA亲和力高通量分析平台，以快速筛选能够特异性结合目的DNA序列的人工ZFP，并且在细胞水平进行验证，为基因标示/识别/转录治疗等提供序列特异性结合蛋白。