A20-尘螨T细胞表位肽外泌体疫苗促进Th1细胞分化治疗过敏性鼻炎的作用及机制研究

Allergic rhinitis is a common clinic disease that lacks of convenient, safe and effective antigen specific immunotherapy. Allergen specific T or B cells epitope vaccines based on the analysis of antigen sequence, recombinantant DNA and peptides systhesis techniques is expected to provide novel strategies. While the establishment of dust mite main allergen derived T cell epitope peptides vaccine and the pathogenesis of induced Th1 response need further evaluated. We speculate that the construction of exosome vaccine (ErDer-A20) that containing Der p2/Der f2 derived T cells epitopes and negative regulatory factor-A20 may induce antigen specific Th1 response and the generation of tolerogenic dendritic cells, and avoiding the possible IgE response and mast cell activation. Based on our previous studies, we aimed to investigate the construction of ErDer-A20, therapeutic effect of ErDer-A20 vaccine in the treatment of mice with allergic rhinitis and the underlying mechanisms.

过敏性鼻炎是临床常见病，仍缺乏安全、有效的对因治疗。尘螨抗原表位疫苗有望替代脱敏疗法给上呼吸道过敏性疾病的治疗带来希望。然而T细胞表位疫苗的优化及其诱导抗原特异性Th1细胞反应的机制仍未明了。去泛素化酶A20作为TNF-α诱导蛋白可负性调控过激的免疫反应，诱导耐受型DC产生，有望协同T细胞表位疫苗调控过敏反应Th1/Th2细胞失衡。另外如何经免疫原性低、易于被靶细胞摄取的载体递送T细胞表位仍有待进一步探讨。前期研究中，我们分析鉴定了尘螨主要抗原T细胞表位并纯化了A20蛋白，本研究将进一步探讨：（1）同时负载Der p2、Der f2抗原T细胞表位肽及A20的外泌体疫苗（ErDer-A20）的构建，及其IgE、T细胞反应性分析；（2）ErDer-A20对小鼠过敏性鼻炎治疗效果；（3）ErDer-A20诱导产生耐受型DC及Th1型细胞反应的表观遗传学调控机制。为过敏性疾病免疫治疗提供理论基础。

尘螨抗原表位疫苗给上呼吸道过敏性疾病的治疗带来希望。然而T细胞表位疫苗的优化及其诱导抗原特异性Th1细胞反应的机制仍未明了。A20作为TNF-α诱导蛋白可负性调控过激的免疫反应，诱导耐受型DC产生，有望协同T细胞表位疫苗调控过敏反应Th1/Th2细胞失衡。另外如何经免疫原性低、易于被靶细胞摄取的载体递送T细胞表位仍有待进一步探讨。前期研究中，我们分析鉴定了尘螨主要抗原T细胞表位并纯化了A20蛋白，本研究探讨了（1）同时负载Der p2、Der f2抗原T细胞表位肽及A20的外泌体疫苗（ErDer-A20）的构建，及其IgE、T细胞反应性分析；（2）ErDer-A20对小鼠AR治疗效果；（3）ErDer-A20诱导产生耐受型DC及Th1型细胞反应的表观遗传学调控机制。研究结果：①成功构建了ErDer-A20疫苗；②ErDerA20疫苗滴鼻明显缓解小鼠AR临床表现，降低了鼻分泌物EPX和MCC、血清sIgE、sIgG1、血清IL-4, IL-5水平；ErDerA20诱导鼻粘膜IL-10+ DCs（TolDC），TolDC进而诱导具有抑制抗原特异性T细胞增殖功能的Treg；③ErDer-A20预处理的小鼠脾脏来源DC与CD4+T细胞共培养，RNAseq分析上述T细胞，结果显示Th1反应的代表基因（IFN-γ等）显著上调，Th2反应有关的基因（IL-4等）显著下调，和内质网应激有关的基因（Ire1等）产生相应变化。来源AR病人周围血标本PBMC，和DC共培养（DC分未经刺激的，和经ErDer-A20刺激的两种）,结果显示，ErDer-A20促进CD4+CD25+T细胞表达Th1细胞因子，下调Th2细胞因子表达；ErDer-A20处理的DC诱导CD4+CD25+T细胞内质网应激；流式细胞术检测发现Th1细胞频率上调，Th2细胞频率下调，与相应基因检测描述一致。结论：ErDer-A20疫苗具有高效，蛋白纯度高，低致敏性优点，能够抑制实验性AR小鼠过敏炎症，机制与ErDerA20诱导出耐受型DC有关，ErDer-A20疫苗预处理的DC能使CD4+T细胞发生Th1反应偏移，诱导CD4+CD25+T细胞内质网应激。ErDer-A20有望替代过敏原特异性免疫治疗成为有效的治疗手段。在项目执行期间，发表了高水平SCI论文11篇，培养了博士研究生2名，硕士研究生4