DNMT1在非小细胞肺癌中作为表观遗传治疗敏感性标记物的研究

DNMT1致抑癌基因高甲基化抑制基因表达。我们前期工作证实，DNMT1变化与表观治疗敏感性有一定相关性；I期非小细胞肺癌患者p16和CDH13在癌组织和纵膈淋巴结中均呈高甲基化状态，则复发率较高。.基于以上系列研究基础，我们设想DNMT1可作为非小细胞肺癌表观遗传治疗敏感性的标记物，拟利用不同遗传特点的细胞株为研究对象，并建立动物移植模型，采用CCK-8、Methylcellulose和western blot等研究不同表观治疗方法处理后癌细胞生长和DNMT1变化的关系；荧光定量PCR检测DNMT1的mRNA表达，免疫共沉淀检测DNMT1和SET7，DNMT1和UHRF1的关系，研究DNMT1蛋白减少机制；MSP、荧光定量PCR等检测APC、CDH13、KLK10、DLEC1等15个抑癌基因甲基化变化，研究抑癌基因甲基化和DNMT1表达的关系。本研究将为肺癌的表观治疗提供理论依据。

DNA甲基化是由DNMT1所催化的表观遗传DNA修饰方式。本课题主要的目的是研究在体内（裸鼠）和体外人类非小细胞肺癌细胞株中DNMT1基因和蛋白表达及其对肿瘤抑癌基因甲基化状态的影响。人类肺鳞癌细胞株A549，H838在体外培养和在裸鼠皮下种植成瘤，并且应用DNA甲基化抑制剂5-Aza+/-去乙酰化酶抑制剂MS-275进行治疗。Western blot检测DNMT1蛋白表达，肿瘤抑癌基因（RASSF1A、APC、ASC等）的甲基化状态用MSP进行检测。结果表明，肿瘤抑癌基因的甲基化状态是由DNMT1基因进行调控，DNMT1的表达随着DNA甲基化的治疗而降低。而在裸鼠体内肿瘤抑癌基因的去甲基化（APC、RASSF1A、ASC）抑制了肿瘤的生长。这些研究结果支持DNA甲基化可作为一种潜在的表观遗传学临床诊断或治疗反应的生物学标志作用，并且在非小细胞肺癌中DNMT1可作为一种潜在的治疗靶点。