TRPV通道对阴道上皮细胞功能的影响以及作用机制的研究

阴道上皮细胞对维持阴道微环境，炎症防御等具有非常重要的作用。TRPV通道是近年研究的热点之一，在机体感受外界刺激（如温度，pH,机械刺激等）中起重要的作用。本课题组的初步研究结果发现阴道组织中有TRPV通道的表达，但对阴道上皮的功能影响仍不清楚。因此本课题拟采用大鼠阴道组织，原代培养的大鼠阴道上皮细胞，以及阴道上皮细胞系VK2/E6E7以及整体动物模型为研究对象，结合膜片钳技术，confocal，冰冻切片，RT-PCR、Western blot、免疫组化等实验技术完成以下内容：1）TRPV家族通道（TRPV1-6）在动情周期中（动情前期，动情期，动情后期，动情间期）阴道组织中的表达情况。2）TRPV通道在阴道组织中的定位。3）阴道中有表达的TRPV通道对阴道上皮细胞功能的影响，并阐明其分子机制以及生理意义。

首先，通过RT－PCR技术发现TRPV1-5通道在大鼠阴道组织，原代培养的大鼠阴道上皮以及人的阴道上皮细胞系VK中均有表达，并且mRNA的表达量大鼠不受动情周期影响。通过western blot和冰冻切片，免疫组化等技术，进一步考察了TRPV1，TRPV2和TRPV4通道蛋白在阴道组织的表达和定位,发现其蛋白在阴道组织的上皮细胞和神经组织中均有表达。其次，加入TRPV1的特异性激动剂CAP，可以在正常大鼠阴道组织中引起短路电流微弱的变化，此变化有浓度依赖性并可被TRPV1的特异性抑制剂CPAZ所抑制。在大鼠细菌性阴道炎的组织中，CAP引起的电流变化大大增强，提示TRPV1可能参与病理条件下阴道组织的异常分泌。加入TRPV4的特异性激动剂GSK，阴道短路电流先上升后下降，其下降支主要KATP酶介导的由K＋离子分泌引起。在整体动物模型中，TRPV4特异性激动剂GSK可促进大鼠和家兔阴道液的分泌，并且大鼠阴道液中K+浓度可影响阴道防御细菌的能力，提示TRPV4的激活可以增加阴道的湿润并且增强阴道上皮先天免疫防御的能力。综上所述，TRPV家族通道对阴道上皮的分泌及先天免疫功能均有重要影响，不同TRPV通道可能在生理或病理条件下执行不同的调节功能。